[发明专利]一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法

权利要求书

1.一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）利用鸡肝细胞对鹅星状病毒进行培养；

（2）鸡肝细胞快速扩增鹅星状病毒，利用鸡肝细胞对鹅星状病毒进行培养扩增的培养基为含1μg/mL TPCK-胰蛋白酶的DMEM-F12培养基；

（3）鸡肝细胞能扩增鹅星状病毒，第三天病毒效价可达1.08×10⁶TCID₅₀/ml。

2.根据权利要求1所述的一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法，其特征在于，步骤（1）中，步骤为：

鸡肝细胞采用含10%胎牛血清的DMEM-F12培养基进行培养，待细胞长满单层后，用PBS洗涤一遍后，以0.25%的胰酶进行消化、传代至所需的细胞培养板中。

3.根据权利要求1所述的一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法，其特征在于，步骤（2）中，步骤为：

将鸡肝细胞接种至6孔板内培养，在汇合度为约70%时，将鹅星状病毒接种细胞，MOI为0.1，做两个重复，以含1μg/mL TPCK-胰蛋白酶的DMEM-F12培养基培养5天，每天收集200μl上清冻于-80℃冰箱备用，同时每孔补200μl含1μg/mL TPCK-胰蛋白酶的DMEM-F12培养基；测定收集上清的TCID₅₀；利用GraphPad Prism 6软件绘制鹅星状病毒生长曲线。

4.根据权利要求1所述的一种利用鸡肝细胞快速分离扩增新型鹅星状病毒的方法，其特征在于，步骤（3）中，病毒在鸡肝细胞上培养到第三天的时候达到最高病毒滴度1.08×10⁶TCID₅₀/ml，然后在第四天和第五天缓慢下降。