[发明专利]一种细梗香草皂苷A的制备方法

说明书

本发明公开了一种细梗香草皂苷A的制备方法，属于医药生物技术领域。包括以下步骤：取切段后的细梗香草，加入乙醇，回流提取2～4次，合并提取液浓缩至无乙醇后，加水沉淀，离心；离心液通过大孔吸附树脂吸附，水洗后，加入碱性溶液，反应24‑120小时，用乙醇梯度洗脱，收集含有细梗香草皂苷A的部分洗脱液；对含有细梗香草皂苷A的部分洗脱液回收乙醇后，加入反相色谱柱中分离，收集含有细梗香草皂苷A的分离液；对含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，重结晶，得到高纯度细梗香草皂苷A。本发明的制备方法简单易行，反应条件温和，环境友好，对试剂和设备要求低，适合大规模工业化生产。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种细梗香草皂苷A的制备方法。

背景技术

细梗香草(LycimachiaCapillipesHemsl)又名满山香、排草、香排草等，其性甘，味平，全草入药。文献研究表明，细梗香草皂苷具有良好的抗肿瘤作用，其中细梗香草皂苷B和C是主要有效成分，细梗香草皂苷B和C具有相同的母核，只有酯键取代基不同，细梗香草皂苷B和C水溶性较差，生物利用度低，细梗香草皂苷B和C都可水解成细梗香草皂苷A，细梗香草皂苷A具有较好的抗肿瘤活性。现有技术在制备细梗香草皂苷A时，通常先制备成富含细梗香草皂苷B和C的提取物，然后水溶解后再加强碱水解，这种条件下化合物的活性基团没有定向的保护，水解过程常伴有较多的副反应，产生较多的新的杂质，水解产物不仅细梗香草皂苷A含量低，杂质多，不利于后续的纯化，而且过程复杂，成本高。

发明内容

为克服现有技术的不足，发明人发明了一种大孔吸附树脂在线水解技术制备细梗香草皂苷A的方法。本发明方法在大孔树脂上在线完成吸附、水解、纯化，可一次性得到含细梗香草皂苷A大于80％的提取物。

为了达到上述目的，本发明是通过以下的技术方案来实现：

本发明所述一种细梗香草皂苷A的制备方法，包括以下步骤：

(1)取切段后的细梗香草，加入其质量10～20倍的乙醇水溶液，回流提取2～4次，每次1～3小时，合并提取液并浓缩至无乙醇后，加水使每1ml混合溶液中含有0.1～0.5克细梗香草药材，充分搅拌，待沉淀完全后离心机离心，收集离心液；

(2)将步骤(1)离心液通过大孔吸附树脂吸附，用2～6倍柱体积的水冲洗树脂，接着用2～6倍柱体积的碱溶液冲洗树脂(冲洗后柱子里保留有碱性溶液)，然后将树脂柱加热到10～60℃保温24～120小时，水洗树脂至流出液呈中性后，用乙醇梯度洗脱，收集含有细梗香草皂苷A的乙醇洗脱液；

(3)将步骤(2)含有细梗香草皂苷A的乙醇洗脱液回收乙醇后，加入反相色谱柱中分离，收集含有细梗香草皂苷A的分离液；

(4)将步骤(3)含有细梗香草皂苷A的分离液回收溶剂后，重结晶，得到高纯度细梗香草皂苷A。

上述技术方案中，优选的，步骤(1)中所述的乙醇水溶液中含有质量分数5～50％的水。

优选的，步骤(1)中所述的离心机是管式离心机或碟片离心机的任意一种，离心转速3000～20000g。

优选的，步骤(2)所述大孔吸附树脂是非极性、弱极性或极性大孔吸附树脂中的一种。

优选的，所述的大孔吸附树脂是非极性大孔吸附树脂中的一种。

优选的，步骤(2)所述碱性溶液是氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液、碳酸钠溶液或氨水中的一种。

优选的，所述的碱性溶液是质量浓度为0.5％～15％的氢氧化钠水溶液。

优选的，步骤(2)所述乙醇梯度洗脱是先用体积浓度10～30％的乙醇水溶液洗脱，然后再用体积浓度40～70％的乙醇水溶液洗脱，收集体积浓度40～70％乙醇水溶液的洗脱液。