[发明专利]一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用

说明书

本发明公开了一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。所述杂交瘤细胞保藏号为CCTCC NO：C202148，分泌的鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗，具有较高的效价，且具有较强的特异性。使用制备的单抗建立了一种以纯化的重组NDRV σB蛋白作为包被抗原，HRP标记的抗σB蛋白单抗作为检测抗体的阻断ELISA，该方法能特异性地识别NDRV阳性血清，而与其它鸭、鹅常见病抗体阳性血清无交叉反应；重复性试验表明，批间和批内的变异系数均小于10％；敏感性为90.5％，特异性为94.5％，且与病毒中和试验的符合率为93.8％。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种分泌鸭新型呼肠孤病毒σB蛋白单抗的杂交瘤细胞、单抗及应用。

背景技术

鸭呼肠孤病毒(duck reovirus，DRV)分为两种基因型，即I型和II型。基因I型为经典型鸭呼肠孤病毒(classical DRV，CDRV)，即番鸭呼肠孤病毒(Muscovey duck reovirus，MDRV)，该病毒主要感染番鸭和半番鸭，引起鸭坏死性肝炎(俗称番鸭“白点病”或“花肝病”)，以肝脾等脏器出现大量粟粒状坏死灶为病理特征，该病自1997以来在我国南方广东、广西、福建、浙江和江西等广泛流行；基因II型为鸭新型呼肠孤病毒(novel DRV，NDRV)，该病毒可引起番鸭、半番鸭、北京鸭和鹅等水禽发病，其特征性病变为肝脾出现严重的坏死和出血(俗称“出血性坏死性肝炎”或“脾出血坏死症”)，该病最早发生于2000年，此后开始在我国的江苏、浙江、福建、广东、河北、山东等省暴发与流行。目前，基因II型(NDRV)已成为我国流行的优势基因型。

NDRV基因组由10个节段的双链RNA构成，全长23419bp。病毒粒子由二十面体对称的双层衣壳组成，直径70nm、无囊膜。依据SDS-PAGE电泳结果均可将基因组分为3个群，分别是：L组群(L1，L2，L3)，M组群(M1，M2，M3)和S组群(S1，S2，S3，S4)。σB是NDRV主要的核衣壳组成成分和外衣壳蛋白，其功能与哺乳动物呼肠孤病毒(Mammalian reovirus，MRV)的σ3蛋白和ARV及CDRV的σB蛋白相似，诱导宿主机体产生群特异性中和抗体。ARV与CDRV的σB蛋白之间存在保守的免疫原性区及群特异性抗原表位。NDRV与CDRV为DRV不同的基因型，而DRV与ARV均属于禽正呼肠孤病毒种群成员；NDRVσB蛋白与ARV及CDRV的σB蛋白氨基酸同源性分别约60％和70％。

目前，NDRV的主要检测方法有病毒分离、RT-PCR、病毒中和试验(VNT)和间接ELISA([1]陈仕龙，陈少莺，程晓霞，江斌，林峰强，王劭，朱小丽，李兆龙，张世忠。3种禽类呼肠孤病毒血清学相关性及致细胞病变差异分析.畜牧兽医学报，2011，42(4)：533-537.[2]YunT，Chen HP，Yu B，Zhang C，Chen L，Ni Z，Hua JG，Ye WC.Development and applicationof an indirect ELISA for the detection of antibodies to novel duckreovirus.Journal ofVirological Methods，2015，220：55-59.)等。其中ELISA方法对于抗原和抗体均可检测，且该方法操作简单、快速、易批量化、以及灵敏性高和特异性强等特点，已成为病原流行病学调查抗体检测的首选方法。现有研究表明，各品种的鸭及鹅均可被NDRV感染及致病，而目前又没有一种商品化的广谱抗不同品种鸭及鹅的通用型血清二抗，这给NDRV病的血清学诊断带来诸多不便。

发明内容

目前NDRVσB蛋白的表位抗原性以及是否存在群特异性抗原表位还不清楚。因此，本申请利用原核表达的重组σB蛋白作为免疫原制备了针对NDRVσB蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)，可用于NDRV特异性检测。