[发明专利]一种与罗非鱼耐盐性相关的SNP标记及其应用

权利要求书

1.一种与荷那龙罗非鱼耐盐性状相关的SNP标记，其特征在于：所述SNP标记的序列如SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：4所示，所述SEQ ID NO：1序列2942bp处或SEQ ID NO：4序列99bp处的SNP位点碱基为G或T，上述SEQ ID NO.1序列2942bp处或SEQ ID NO：4序列99bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型的荷那龙罗非鱼为耐盐的荷那龙罗非鱼。

2.一种检测权利要求1所述的与荷那龙罗非鱼耐盐性相关的SNP标记的引物对或包含该引物对的试剂盒在耐盐荷那龙罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于：

所述引物对的核苷酸序列如下所示：

引物1 ：5’- AGAAAGCCATCAGCATCAGT-3’，SEQ ID NO：2；

引物2 ：5’-AGTGTCTCTGCATGTCGTCT -3’，SEQ ID NO：3；

所述应用方法为：通过检测荷那龙罗非鱼SNP标记对应的基因型，检测得到SEQ IDNO.1的序列2942bp处或SEQ ID NO：4序列99bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型的罗非鱼为耐盐的荷那龙罗非鱼或荷那龙罗非鱼亲本。

3.根据权利要求2所述的引物对或试剂盒在耐盐荷那龙罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于所述应用方法为：

提取荷那龙罗非鱼DNA，采用SEQ ID NO：2序列和SEQ ID NO：3序列的引物对进行PCR扩增，选择具有SEQ ID NO：1序列2942bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型或SEQ IDNO.4序列99bp处碱基多态位点对应基因型为GG基因型的荷那龙罗非鱼作为耐盐荷那龙罗非鱼或亲本。

4.根据权利要求3所述的引物对或试剂盒在耐盐荷那龙罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于：所述PCR扩增反应体系为25 µL的反应体系，具体如下：

H₂O 19.8µL；

10×PCR Buffer 2.5µL；

4×dNTP 10mmol/L 0.5µL；

Taq酶 5U/µL 0.2µL；

引物1 10µmol/L 0.5µL；

引物2 10µmol/L 0.5µL；

样本DNA 1.0µL。

5.根据权利要求3所述的引物对或试剂盒在耐盐荷那龙罗非鱼亲本筛选或检测中的应用，其特征在于：所述PCR扩增反应条件为：94℃预变性 2 min；94℃变性30 秒，54℃退火20秒，72℃延伸30秒，32个循环；72℃延伸7 min。