[发明专利]一种快速提取高质量DNA的试剂及方法

权利要求书

1.一种快速提取高质量DNA的试剂，其特征在于，包括：

1)提取缓冲液，其包括：2％溴化十六烷基三甲基铵，100mM、pH8.0 Tris-HCl，20mM、pH8.0乙二胺四乙酸，1.4M NaCl和2％β-巯基乙醇；

2)终浓度为3.5mg/mL的RNA水解酶A；

3)抽提剂，包括酚、氯仿和异戊醇的混合液，所述混合液中酚：氯仿：异戊醇体积比为25：24：1。

2.一种快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，包括利用权利要求1所述的试剂提取真菌中DNA的步骤。

3.如权利要求2所述的快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤1：收集真菌菌丝体，并进行预处理后，在液氮环境中研磨成粉末；

步骤2：将粉末加入预热的提取缓冲液中，混合均匀，再于65℃水浴保温20-30min，期间每隔5-10min颠倒混匀一次；所述提取缓冲液包括：2％溴化十六烷基三甲基铵，100mM、pH8.0 Tris-HCl，20mM、pH8.0乙二胺四乙酸，1.4M NaCl和2％β-巯基乙醇；

步骤3：步骤2反应液冷却至室温后，将等体积抽提剂进行抽提，混合均匀，之后再离心，弃沉淀取上清液；所述抽提剂为酚：氯仿：异戊醇体积比为25：24：1的混合液；

步骤4：向步骤3所得上清液中加入终浓度为3.5mg/mL的RNA水解酶A，高温消化以去除RNA；

步骤5：冷却至室温后，向步骤4反应液中加入等体积的所述抽提剂，重新抽提、离心，弃沉淀取上清液；

步骤6：向步骤5所得上清液中加入等体积的氯仿和异戊醇混合液，混合均匀再离心，弃沉淀取上清；

步骤7：向步骤6所得上清液中加入预冷的异丙醇，混合均匀，-20℃条件下放置20-30min，沉淀DNA；再离心，弃上清液取沉淀；

步骤8：用75％乙醇洗涤步骤7所述沉淀2-3次，37℃条件下,干燥20-30min后，加无菌水溶解沉淀，-20℃保存。

4.如权利要求3所述的快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，步骤2中所述粉末和提取缓冲液的质量体积比1-3:10。

5.如权利要求3所述的快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，步骤3、步骤5、步骤6-7中所述离心条件均为：10000-15000r/min离心10-15min。

6.如权利要求3所述的快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，步骤4中所述RNA酶消化条件为：65℃水浴30min。

7.如权利要求3所述的快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，所述氯仿和异戊醇混合液中氯仿:异戊醇体积比为24:1。

8.如权利要求3所述的快速提取高质量DNA的方法，其特征在于，步骤7中所述预冷的异丙醇加入体积为上清液中的2/3体积。