[发明专利]基于AFM1抗独特型纳米抗体替代抗原的VHH-ELISA方法

权利要求书

1.一种黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体作为非疾病诊断治疗目的的黄曲霉毒素M₁抗原替代物的应用，所述黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体为黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体VHHC4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.基于黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体替代抗原的非疾病诊断治疗目的的VHH-ELISA方法，步骤如下：将黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体替代黄曲霉毒素M₁抗原包被酶标板，将待检测样品作为竞争物进行竞争抑制ELISA反应，检测获得结合率B/B₀值，基于黄曲霉毒素M₁浓度-结合率B/B₀值标准曲线，获得黄曲霉毒素M₁的浓度，所述黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体为黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体VHH C4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.根据权利要求2所述的VHH-ELISA方法，其特征在于：所述的竞争抑制ELISA反应具体为：将黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体VHH C4稀释后包被于酶标板，4℃包被过夜；次日，用封闭液进行封闭，37℃下孵育1h；向酶标孔中加入甲醇/PBS缓冲液，将黄曲霉毒素M₁单克隆抗体和竞争物用PBS 7.4缓冲液稀释后加入到酶标孔中，37℃孵育1h；加入辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体，37℃温育1h；再加入显色液，37℃反应15min后，测定OD₄₅₀，获得结合率B/B₀值。

4.根据权利要求2或3所述的VHH-ELISA方法，其特征在于：所述黄曲霉毒素M₁抗独特型纳米抗体的包被浓度为1.25μg/mL～20μg/mL。

5.根据权利要求3所述的VHH-ELISA方法，其特征在于：所述封闭液为3％BSA、1.5％OVA或3％脱脂奶粉。

6.根据权利要求3所述的VHH-ELISA方法，其特征在于：所述甲醇/PBS缓冲液的pH值为7.0～7.4。

7.根据权利要求3所述的VHH-ELISA方法，其特征在于：所述甲醇/PBS缓冲液中甲醇浓度为5％～10％。

8.根据权利要求2所述的VHH-ELISA方法，其特征在于：所述的待检测样品为乳产品，包括酸奶，牛奶或奶粉。