[发明专利]一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法

权利要求书

1.一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采集美丽硬仆骨舌鱼子代及候选亲本的DNA；

(2)以步骤(1)所取DNA为模板，采用如下SF-1～10共10对微卫星标记引物分别进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行检测分析，计算10对微卫星标记的累计排除率，完成亲本与子代的亲子关系鉴定；

所述10对微卫星标记引物序列分别如下：

SF-1：

F:TCTCTGAGCTGAAACGACCG(SEQ ID NO:1)；

R:TAAATATGTGTGTGCGCGCG(SEQ ID NO:2)；

SF-2：

F:GCAGAGAGCCAGGAAGTGAG(SEQ ID NO:3)；

R:GTTGCACCATGGTCTCCAGA(SEQ ID NO:4)；

SF-3：

F:TGCAAAGAAGGAGGTGGGAC(SEQ ID NO:5)；

R:GCAACAACCATGGGCTTTCC(SEQ ID NO:6)；

SF-4：

F:GGAGCCATCACCTTTGTGGA(SEQ ID NO:7)；

R:AGGTCCATCCCCTATTGCCT(SEQ ID NO:8)；

SF-5：

F:ACCTCCTCCATTAGTGGCCT(SEQ ID NO:9)；

R:AGGTTGTACAAGGTGGAGCG(SEQ ID NO:10)；

SF-6：

F:TGTGCTGGGAGGCATGAATT(SEQ ID NO:11)；

R:TGGTTGTTGTCCTGTGGCTT(SEQ ID NO:12)；

SF-7：

F:GAGTAGGGTTGCGCTGAACT(SEQ ID NO:13)；

R:CCCTGTGTCTGTGTGGGTTT(SEQ ID NO:14)；

SF-8：

F:CGCCATTTAACCAGCATGCA(SEQ ID NO:15)；

R:TCAACTGGTGTTCCACAGGG(SEQ ID NO:16)；

SF-9：

F:ATGTGCGCTTTCAGGGATCA(SEQ ID NO:17)；

R:TGCAGCCGTTTCAGATACCA(SEQ ID NO:18)；

SF-10：

F:CCGTTGGAGGGAAGTGTCAT(SEQ ID NO:19)；

R:TGTTCATTGACTGCGGGAGG(SEQ ID NO:20)。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法，其特征在于步骤(1)中采集DNA的步骤为：取美丽硬仆骨舌鱼子代及候选亲本的臀鳍组织，用DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

3.根据权利要求1或2所述的一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法，其特征在于步骤(2)中所述PCR扩增的反应体系包括：

10×Buffer 2.5μL；

Mg²⁺，25mmol/L，1μL；

dNTPs，各2mmol/L，1μL；

上下游引物，10μmol/L，各1μL；

模版DNA，50ng/μL，1μL；

Taq DNA聚合酶，1U；

ddH₂O，适量。

4.根据权利要求3所述的一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法，其特征在于步骤(2)中所述PCR扩增的反应程序如下：

首先94℃预变性3min；然后94℃变性30s，56～60℃退火30s，72℃延伸30s，共30个循环；最后72℃延伸10min。