[发明专利]一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法

说明书

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法。采集美丽硬仆骨舌鱼子代及候选亲本的DNA，以所取DNA为模板，采用SF‑1～10共10对微卫星标记引物分别进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行检测分析，计算10对微卫星标记的累计排除率，完成亲本与子代的亲子关系鉴定。本发明方法利用10对特异性微卫星引物对美丽硬仆骨舌鱼的亲子关系进行鉴定，具有多态性高、累计排除率高的优点。本发明鉴定方法准确，不影响鱼体生长，能有效提高美丽硬仆骨舌鱼人工繁殖效率，促进种质资源的保护及合理性开发。

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法。

背景技术

美丽硬仆骨舌鱼(Scleropages formosus)俗称“亚洲龙鱼”，隶属于骨舌鱼目(Osteoglossiformes)、骨舌鱼科(Osteoglossidae)。有金龙鱼(Gold Arowana)、红龙鱼(Red Arowana)和青龙鱼(Green Arowana)三个自然群体。

因珍稀名贵被誉为“观赏鱼之王”。在其原产地东南亚地区，深受民众喜爱，由于“龙文化”等因素，被当地华人称为“龙鱼”。因在观赏鱼市场上需求急剧增长而导致的过渡捕捞使其濒临绝种，被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES，简称华盛顿公约)附录I，成为国际一级保护鱼类。目前注册渔场进行人工繁殖时尚不能实现一对一繁殖，主要是通过模拟自然环境条件，根据池塘面积投放数十尾亲鱼进行群体繁殖。产卵后雄鱼会将卵含在口中孵化，可由其颊部明显突出下垂加以判断，3-4周后将含卵雄鱼捞出，从雄鱼口中取出仔鱼。由于这种繁殖特征无法确定仔鱼的母本。若检查不及时，雄鱼已将仔鱼吐出，则在池塘内收集到的仔鱼双亲均不能确定。无法确定子代的亲本来源，会导致养殖群体的系谱混乱。因此，在不影响鱼体生长的情况下寻找到一种准确鉴定亲子关系的方法，将有效提高美丽硬仆骨舌鱼人工繁殖效率，促进种质资源的保护及合理性开发。

文献“美丽硬仆骨舌鱼全基因组微卫星分布规律特征，CNKI:SUN:ZNTB.0.2019-23-025”及“应用微卫星多态分析美丽硬仆骨舌鱼三个品系遗传结构，第十二届中国科协年会论文集，2010-11-01”公开了美丽硬仆骨舌鱼的微卫星分布规律特征及遗传结构，但如何利用上述特征并建立合适、准确的方法对美丽硬仆骨舌鱼的亲子关系进行鉴定的技术却鲜有报道。

发明内容

针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的首要目的在于提供一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法。本发明方法利用10对特异性微卫星引物对美丽硬仆骨舌鱼的亲子关系进行鉴定，具有多态性高、累计排除率高的优点。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种鉴定美丽硬仆骨舌鱼亲子关系的微卫星标记方法，包括如下步骤：

(1)采集美丽硬仆骨舌鱼子代及候选亲本的DNA；

(2)以步骤(1)所取DNA为模板，采用如下SF-1～10共10对微卫星标记引物分别进行PCR扩增，对PCR扩增产物进行检测分析，计算10对微卫星标记的累计排除率，完成亲本与子代的亲子关系鉴定；

所述10对微卫星标记引物序列分别如下：

SF-1：

F:TCTCTGAGCTGAAACGACCG(SEQ ID NO:1)；

R:TAAATATGTGTGTGCGCGCG(SEQ ID NO:2)；

SF-2：

F:GCAGAGAGCCAGGAAGTGAG(SEQ ID NO:3)；

R:GTTGCACCATGGTCTCCAGA(SEQ ID NO:4)；

SF-3：