[发明专利]一种利用雪白白疆菌发酵生产环孢菌素的培养基和培养方法

权利要求书

1.一种利用雪白白疆菌发酵生产环孢菌素的培养基，其特征在于包括种子培养基和发酵培养基，其中所述种子培养基组成为：

甘蔗糖蜜36～40kg/m3、藕粉固液混合物160～200L/m3或脱盐乳清粉11～15kg/m3、牛血蛋白6-10kg/m3、蝗虫粉或蚯蚓粉蛋白液280-300L/m3、复合酵母氮素68～72kg/m3、轻质碳酸钙1～5kg/m3、硫酸铵0.3～0.7kg/m3；

所述发酵培养基组成为：

甘蔗糖蜜41～45kg/m3、藕粉固液混合物200～240L/m3或脱盐乳清粉14～18kg/m3、牛血蛋白6-10kg/m3、蝗虫粉或蚯蚓粉蛋白液290-310L/m3、复合酵母氮素71～75kg/m3、轻质碳酸钙1～5kg/m3、硫酸铵0.5～0.9kg/m3、硫酸镁0.01～0.05kg/m3、硫酸锌0.003～0.007kg/m3、磷酸二氢钾0.05～0.09kg/m3、硫酸锰0.002～0.006kg/m3。

2.按照权利要求1所述培养基，其特征在于所述藕粉固液混合物制备方法包括如下步骤：首先藕粉加入水中；其次加入硫酸溶液，调节pH至5-6；最后加入碳酸钙和α-淀粉酶，升温至80-90℃，搅拌20-40min，得到藕粉固液混合物，其配伍比例如下：

硫酸浓度：4-5％；

W藕粉∶L水＝1kg∶8-10L；

W藕粉∶W碳酸钙＝1kg∶0.02-0.03kg；

W藕粉∶Wα-淀粉酶＝1kg∶0.01-0.02kg。

3.按照权利要求1所述培养基，其特征在于所述蝗虫粉蛋白液或蚯蚓粉蛋白液制备方法包括如下步骤：

(1)浸泡

分别配置10-20％的氯化钠和5-10％的氢氧化钠混合溶液，加入蝗虫粉或蚯蚓粉，搅拌40-60min，过滤，

W蝗虫粉或蚯蚓粉∶L混合溶液＝1kg∶4-6L；

(2)制备蛋白液

过滤后的蝗虫粉或蚯蚓粉加入水，首先加入10％的硫酸溶液，调节pH至5-6，其次加入酸性蛋白酶，最后升温至60-70℃，搅拌120-150min，得到蝗虫粉蛋白液或蚯蚓粉蛋白液，

W蝗虫粉或蚯蚓粉∶L水＝1kg∶4-6L，

W蝗虫粉或蚯蚓粉∶W酸性蛋白酶＝1kg∶0.02-0.03kg。

4.一种利用权利要求1-3任一项所述培养基发酵生产环孢菌素的培养方法，其特征在于所述培养方法包括如下步骤：

(1)种子培养：首先将种子培养基灭菌并冷却至室温，并用无菌空气保压，然后在火焰保护下，将已经培养好的雪白白疆菌母瓶液接入种子培养基中进行培养，至菌体浓度10～14％移种；

(2)发酵培养：先将发酵培养基灭菌，冷却至室温，并用无菌空气保压，然后将培养好的种子培养液移入发酵培养基进行发酵培养，环孢菌素化学效价＞16000u/ml时终止发酵。

5.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述步骤(2)中还包括控制发酵液粘度为8-14mpa.s的步骤。

6.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述培养好的雪白白疆菌摇瓶种子液质量要求为菌体浓度6～10％，镜检无杂菌，接种量为5-7％。

7.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述种子培养条件为：罐压0.03～0.06MPa；罐温25～27℃；空气流量：20～60m3/h；搅拌转速：种子培养前10h，进行空气搅拌，空气搅拌结束后，搅拌器转速控制在40～60r/min。

8.按照权利要求4所述的培养方法，其特征在于所述发酵培养条件为：

a培养基初始pH：发酵培养基灭菌后pH控制在6～7；

b温度：培养温度25～27℃；

c搅拌转速：转速控制在60～80r/min；

d压力控制：罐压0.05～0.06MPa；

e pH控制：发酵过程中pH控制在6～7；

f粘度控制：使用数字式粘度计检测发酵液粘度，控制粘度8-14mpa.s。