[发明专利]一种利用雪白白疆菌发酵生产环孢菌素的培养基和培养方法

说明书

本发明公开一种利用雪白白疆菌发酵生产环孢菌素的新培养基和培养方法，由于采用本发明的培养基和培养方法，提高了原料利用率的同时降低发酵液粘度，且通过简化工艺来降低染菌率，并有效提高了环孢菌素发酵单位。

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种利用雪白白疆菌发酵生产环孢菌素的培养基和培养方法。

背景技术

目前在器官移植领域，环孢菌素仍然是最基本的免疫抑制用药。除肝脏移植治疗可以用FK506替代外，其他领域都很难被替代。同时，环孢菌素还可以用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣、再生障碍性贫血、皮肤肌炎以及肾综合症的治疗等。

目前国内外实现了环孢菌素的工业化生产，主要是通过工业应用比较多的微生物雪白白疆菌发酵产生环孢菌素，存在的问题主要是：

1)环孢菌素常规培养基配方中的碳源是葡萄糖或淀粉，氮源有蛋白胨(包含动物蛋白)、豆饼粉和酵母粉，环孢菌素发酵培养结束，发酵液粘度较高，其粘度35mpa.s，为提取纯化环孢菌素带来一定的难度，环孢菌素的发酵规模不超过50m3，发酵单位＜14000u/ml。

2)目前，国内相关文献资料公开了环孢菌素培养基配方和配伍比例，其适用于实验室条件或进行验证类试验，缺少完整的工业化大生产的培养基配方和配伍比例。同时，文献资料公开了环孢菌素发酵过程中需要进行补料，主要是补入氮源。利用公开的文献资料，进行了工业化大生产验证，确认培养基配方和配伍比例后，在50m3发酵罐中进行了生产验证，发酵过程中进行了补料，补入的物料主要是氮源，从而容易导致染菌问题。

发明内容

本发明的目的之一就在于提供一种原料利用率提高同时发酵液粘度降低，且简化工艺降低染菌率，并有效提高环孢菌素发酵单位的培养基；本发明的另一目的在于提供一种环孢菌素发酵生产的培养方法。

本发明第一方面涉及一种利用雪白白疆菌发酵生产环孢菌素的培养基。

所述种子培养基组成为：

甘蔗糖蜜36～40kg/m3、藕粉固液混合物160～200L/m3或脱盐乳清粉11～15kg/m3、牛血蛋白6-10kg/m3、蝗虫粉或蚯蚓粉蛋白液280-300L/m3、复合酵母氮素68～72kg/m3、轻质碳酸钙1～5kg/m3、硫酸铵0.3～0.7kg/m3；

所述发酵培养基组成为：

甘蔗糖蜜41～45kg/m3、藕粉固液混合物200～240L/m3或脱盐乳清粉14～18kg/m3、牛血蛋白6-10kg/m3、蝗虫粉或蚯蚓粉蛋白液290-310L/m3、复合酵母氮素71～75kg/m3、轻质碳酸钙1～5kg/m3、硫酸铵0.5～0.9kg/m3、硫酸镁0.01～0.05kg/m3、硫酸锌0.003～0.007kg/m3、磷酸二氢钾0.05～0.09kg/m3、硫酸锰0.002～0.006kg/m3。

所述藕粉固液混合物制备方法包括如下步骤

首先藕粉加入水中；其次加入硫酸溶液，调节pH至5-6；最后加入碳酸钙和α-淀粉酶，升温至80-90℃，搅拌20-40min，得到藕粉固液混合物，配伍比例是：

硫酸浓度：4-5％；

W藕粉∶L水＝1kg∶8-10L；

W藕粉∶W碳酸钙＝1kg∶0.02-0.03kg；

W藕粉∶Wα-淀粉酶＝1kg∶0.01-0.02kg。

所述蝗虫粉蛋白液或蚯蚓粉蛋白液制备方法包括如下步骤：

(1)浸泡

分别配置10-20％的氯化钠和5-10％的氢氧化钠混合溶液，加入蝗虫粉或蚯蚓粉，搅拌40-60min，过滤，