[发明专利]一种自发类风湿性关节炎小鼠模型的构建方法

权利要求书

1.一种自发类风湿性关节炎小鼠模型的构建方法，其特征在于根据临床病人的全基因组测序结果发现激活型SYK基因突变，并利用基因工程技术构建与病人突变位点一致的小鼠模型包括：设计靶向小鼠Syk基因目的突变位点的sgRNA，并构建sgRNA表达载体；通过体外转录分别得到上述sgRNA及表达Cas9的mRNA；将转录好的上述sgRNA与Cas9 mRNA进行纯化，并检测其浓度；合成单链DNA模版ssOligo；将制备好的上述样品按照终浓度均为50ng/uL进行混合；进行胚胎的显微注射，完成注射后将胚胎移植到假孕母鼠的子宫内，等待基因突变小鼠的出生，其中所述SYK小鼠突变位点分别为：Syk-Ser544Tyr，Syk-Ser544Phe，Syk-Met444Ile，Syk-Ala347Thr或Syk-Pro336Phe。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述SYK小鼠突变为Syk-Ser544Tyr，Syk-Ser544Phe，Syk-Met444Ile，Syk-Ala347Thr和Syk-Pro336Phe突变的随机组合，或者通过删除Syk片段得到激活型的Syk基因或者cDNA。

3.根据权利要求1至2中任一所述的方法，其特征在于：所述基因工程构建技术方法为利用CRISPR-CAS9技术，同源重组将所述突变定点引入到Syk基因中。

4.根据权利要求1至2中任一所述的方法，其特征在于：利用转座酶系统将所述的突变非定点整合到小鼠体内。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述转座酶系统为睡美人转座子或Piggybac转座子系统。

6.根据权利要求1至2中任一所述的方法，其特征在于：用病毒或非病毒感染的方式将突变Syk编码区非定点整合到造血干细胞，随后再移植到小鼠体内。

7.一种SYK基因新发激活型点突变体，其特征在于：包括Syk-Ser544Tyr或Syk-Ser544Phe，即小鼠Syk基因544位氨基酸由丝氨酸Ser变为酪氨酸Tyr或苯丙氨酸Phe；或Syk-Met444Ile，即小鼠Syk基因444位氨基酸由甲硫氨酸Met变为异亮氨酸Ile；或Syk-Ala347Thr，即小鼠Syk基因347位氨基酸由丙氨酸Ala变为苏氨酸Thr；或Syk-Pro336Phe，即小鼠Syk基因336位氨基酸由脯氨酸Pro变为苏氨酸Thr；或者通过将上述Syk突变随机组合；或者通过删除Syk片段得到激活型的Syk基因或者cDNA。