[发明专利]用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法在审
| 申请号： | 202110338117.0 | 申请日： | 2021-03-30 |
| 公开（公告）号： | CN113029734A | 公开（公告）日： | 2021-06-25 |
| 发明（设计）人： | 姜云瀚 | 申请（专利权）人： | 姜云瀚 |
| 主分类号： | G01N1/30 | 分类号： | G01N1/30;G01N15/14 |
| 代理公司： | 成都熠邦鼎立专利代理有限公司 51263 | 代理人： | 曾克 |
| 地址： | 610000 四川省成都市*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 细胞学 检测 细胞 染色 方法 | ||
1.用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，包括如下步骤：
A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt-MEM培养液按体积份数比0.5-1.5:12-14充分混合，室温孵育10-15min，得到混合液1；
A2：将活细胞抗体和opt-MEM培养液按体积份数比0.5-1.5:45-55充分混合，室温孵育10-15min，得到混合液2；
A3：将混合液1和混合液2按体积份数比50-55:51-54充分混合，室温孵育10-15min，得到混合液3；
A4：将混合液3加入到含有PBS溶液的活细胞悬液中，得到混合液4，所述混合液3和PBS溶液体积份数比为50-55:100，所述混合液4在温度35-40℃、避光环境中孵育25-30min，用PBS溶液清洗1-2遍，完成染色。
2.根据权利要求1所述的用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，包括如下步骤：
A1：将活细胞免疫荧光辅助剂和opt-MEM培养液按体积份数比1:12.5充分混合，室温孵育15min，得到混合液1；
A2：将活细胞抗体和opt-MEM培养液按体积份数比1:50充分混合，室温孵育15min，得到混合液2；
A3：将混合液1和混合液2按体积份数比54:52充分混合，室温孵育15min，得到混合液3；
A4：将混合液3加入到含有PBS溶液的活细胞悬液中，得到混合液4，所述混合液3和PBS溶液体积份数比为53:100，所述混合液4在温度37℃、避光环境中孵育30min，用PBS溶液清洗2遍，完成染色。
3.根据权利要求1所述的用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，所述步骤A2中，活细胞抗体为细胞核内蛋白一抗和二抗混合物，一抗和二抗的重量份数比为1:1。
4.根据权利要求1所述的用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，所述步骤A2中，活细胞抗体为荧光标记的细胞内蛋白抗体。
5.根据权利要求1所述的用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，所述步骤A1中，所述活细胞免疫荧光辅助剂的制备方法，包括如下步骤：
B1：将去离子水加热至75-85℃，加入线性聚乙烯亚胺，充分溶解后，冷却到室温，得到冷却溶液，所述去离子水和线性聚乙烯亚胺的重量份数比为：500:1；
B2：将冷却溶液PH调至6-8，然后用0.22μm的针头过滤器过滤，过滤后保持在3-5℃，得到活细胞免疫荧光辅助剂。
6.根据权利要求5所述的用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，所述步骤A1中，所述活细胞免疫荧光辅助剂的制备方法，包括如下步骤：
B1：将去离子水加热至80℃，加入线性聚乙烯亚胺，充分溶解后，冷却到室温，得到冷却溶液，所述去离子水和线性聚乙烯亚胺的重量份数比为：500:1；
B2：将冷却溶液PH调至7，然后用0.22μm的针头过滤器过滤，过滤后保持在4℃，得到活细胞免疫荧光辅助剂。
7.根据权利要求5所述的用于流式细胞学检测的活细胞胞内或核内染色方法，其特征在于，所述步骤B1中，所述线性聚乙烯亚胺的分子量为40000。
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