[发明专利]一种快速检测贝莱斯芽胞杆菌的方法及其应用

权利要求书

1.特异引物对，包括引物F和引物R；

所述引物F为如下a1)或a2)：

a1)SEQ ID NO:2所示的单链DNA分子；

a2)将SEQ ID NO:2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ IDNO:2具有相同功能的DNA分子；

所述引物R为如下a3)或a4)：

a3)SEQ ID NO:3所示的单链DNA分子；

a4)将SEQ ID NO:3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ IDNO:3具有相同功能的DNA分子。

2.权利要求1所述特异引物对的应用，为b1)或b2)或b3)或b4)或b5)或b6)：

b1)检测贝莱斯芽胞杆菌；

b2)鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌；

b3)评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力；

b4)制备用于检测贝莱斯芽胞杆菌的试剂盒；

b5)制备用于鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌的试剂盒；

b6)制备用于评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力的试剂盒。

3.一种试剂盒，包括权利要求1所述特异引物对。

4.权利要求3所述试剂盒的应用，为b1)或b2)或b3)：

b1)检测贝莱斯芽胞杆菌；

b2)鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌；

b3)评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力。

5.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将权利要求1所述特异引物对中的各引物分别单独包装的步骤。

6.鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌的方法，为Q1)或Q2)：

Q1)以待测菌的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果PCR扩增产物中含有大小为193bp的DNA片段，则待测菌为或疑似为贝莱斯芽胞杆菌；如果PCR扩增产物中不含有大小为193bp的DNA片段，则待测菌不为或疑似不为贝莱斯芽胞杆菌；

Q2)以待测菌的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果PCR扩增产物中含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段，则待测菌为或疑似为贝莱斯芽胞杆菌；如果PCR扩增产物中不含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段，则待测菌不为或疑似不为贝莱斯芽胞杆菌。

7.检测待测物质是否含有贝莱斯芽胞杆菌的方法，为R1)或R2)：

R1)以待测物质的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果PCR扩增产物中含有大小为193bp的DNA片段，则待测物质含有或疑似含有贝莱斯芽胞杆菌；如果PCR扩增产物中不含有大小为193bp的DNA片段，则待测物质不含有或疑似不含有贝莱斯芽胞杆菌；

R2)以待测物质的基因组DNA为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果PCR扩增产物中含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段，则待测物质为含有或疑似含有贝莱斯芽胞杆菌；如果PCR扩增产物中不含有核苷酸序列如SEQID NO:1所示的DNA片段，则待测物质不含有或疑似不含有贝莱斯芽胞杆菌。

8.评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力的方法，为S1)或S2)：

S1)向待测土壤中接种贝莱斯芽胞杆菌，静置培养；之后提取培养后的待测土壤的基因组DNA并以其作为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增；PCR扩增产物中大小为193bp的DNA片段的含量越多，则待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力越强；

S2)向待测土壤中接种贝莱斯芽胞杆菌，静置培养；之后提取培养后的待测土壤的基因组DNA并以其作为模板，采用权利要求1所述特异引物对进行PCR扩增；PCR扩增产物中含有核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的DNA片段的含量越多，则待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力越强。