[发明专利]一种快速检测贝莱斯芽胞杆菌的方法及其应用

说明书

本发明公开了一种快速检测贝莱斯芽胞杆菌的方法及其应用。该方法为以待测菌的基因组DNA为模板，采用特异引物对进行PCR扩增，然后进行如下判断：如果PCR扩增产物中含有大小为193bp的DNA片段，则待测菌为或疑似为贝莱斯芽胞杆菌；特异引物对由SEQ ID NO:2所示的引物F和SEQ ID NO:3所示的引物R组成。实验证明，特异引物对可以检测贝莱斯芽胞杆菌，不仅灵敏度高，而且特异性好；还可用于评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力，即对贝莱斯芽胞杆菌在土壤中的定殖动态进行监测。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速检测贝莱斯芽胞杆菌的方法及其应用。

背景技术

利用有益微生物来防治植物病害具有绿色、无污染等优点，也是目前研究的热点。生防芽胞杆菌在土壤中广泛存在，因具有抗逆性强、易分离等特点，成为目前应用最为广泛的有益微生物。生防芽胞杆菌在病害防治方面也广有报道，但有关芽胞杆菌的检测方面研究较少。传统的生防菌检测主要是通过平板检测法和选择性培养基，不仅耗时耗力，检测周期较长，而且无法对自然环境中的有益微生物进行快速检测。

芽胞杆菌种类多样，包括枯草芽胞杆菌、解淀粉芽胞杆菌、贝莱斯芽胞杆菌、蜡样芽孢杆菌等。贝莱斯芽胞杆菌是近年来新命名的、分离于解淀粉芽胞杆菌中一类芽胞杆菌，具有巨大的应用前景。贝莱斯芽胞杆菌与解淀粉芽胞杆菌极为相近，但仅凭单个保守基因序列难以区分，目前主要通过多基因联合构建系统发育树的方法进行鉴定。

发明内容

本发明的目的为特异检测贝莱斯芽胞杆菌。

本发明首先保护特异引物对，包括引物F和引物R；

所述引物F可为如下a1)或a2)：

a1)SEQ ID NO:2所示的单链DNA分子；

a2)将SEQ ID NO:2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO:2具有相同功能的DNA分子；

所述引物R可为如下a3)或a4)：

a3)SEQ ID NO:3所示的单链DNA分子；

a4)将SEQ ID NO:3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与SEQID NO:3具有相同功能的DNA分子。

所述特异引物对具体可由所述引物F和所述引物R组成。

本发明还保护上述任一所述特异引物对的应用，可为b1)或b2)或b3)或b4)或b5)或b6)：

b1)检测贝莱斯芽胞杆菌；

b2)鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌；

b3)评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力；

b4)制备用于检测贝莱斯芽胞杆菌的试剂盒；

b5)制备用于鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌的试剂盒；

b6)制备用于评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力的试剂盒。

本发明还保护一种试剂盒，包括上述任一所述特异引物对。

本发明还保护所述试剂盒的应用，可为b1)或b2)或b3)：

b1)检测贝莱斯芽胞杆菌；

b2)鉴定待测菌是否为贝莱斯芽胞杆菌；

b3)评价待测土壤中贝莱斯芽胞杆菌的定殖能力。

本发明还保护所述试剂盒的制备方法，包括将上述任一所述特异引物对中的各引物分别单独包装的步骤。