[发明专利]一种检测耳聋基因的参考品及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种检测耳聋基因的参考品及其制备方法与应用。所述参考品包括片段化的母体基因组DNA和片段化的胎儿基因组DNA。使用本发明的参考品进行文库构建，并且分别使用用于计算胎儿游离DNA比例的多个SNP位点的上、下游引物组进行两轮特异性扩增，能够准确、高效地检测耳聋基因突变，其结果与羊水穿刺检测分型一致，但安全性、无创性和高效性方面明显优于羊水穿刺检测。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种检测耳聋基因的参考品及其制备方法与应用。

背景技术

听觉系统中传音、感音及其听觉传导通路中的听神经和各级中枢发生病变，引起听功能障碍，产生不同程度的听力减退，统称为耳聋。耳聋的病因复杂，遗传因素是导致耳聋的主要原因。遗传性耳聋根据其临床表型分为非综合征型耳聋(non-syndromic hearingimpairment，NSHI)与综合征型耳聋(syndromic hearing impairment，SHI)。非综合征型耳聋最常见，占总数的70％。非综合性耳聋的遗传方式表现为：常染色体隐性遗传(约75％-80％)、常染色体显性遗传(约20％)、X-连锁(约2-5％)和线粒体母系遗传(约1％)。在这些遗传方式中，临床上已经明确了GJB2与SLC26A4基因突变是导致耳聋的第一位与第二位致病原因。

传统的耳聋基因产前诊断主要通过羊膜腔穿刺术(简称羊穿)、绒毛穿刺术或脐带血穿刺术等有创操作获取胎儿细胞进行检测，为侵入性产前诊断。侵入性产前诊断虽然准确度高，但可能造成胎儿损伤、流产或宫内感染等风险，降低了产前诊断的依从性。

有相关研究发现母体血液中存在着胎儿的游离DNA，同时，证明了游离DNA诊断遗传性疾病的可行性和实际性。因此，可以通过采集孕妇静脉血，利用高通量DNA测序技术对母体外周血浆中的游离DNA片段进行测序，并将测序结果进行生物信息分析，可以从中得到胎儿的遗传信息，从而检测胎儿耳聋相关基因的信息。

目前无创产前耳聋基因检测技术没有参考品，从而严重制约了相关产品研发和现有产品的质量控制。因此，本发明主要针对无创耳聋基因的检测技术，开发出一种应用于无创耳聋基因检测参考品的方法。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种检测耳聋基因的参考品，能够根据胎儿DNA含量和耳聋基因位点的检测频率，获得母体和胎儿的基因型信息。

本发明还提出一种上述参考品的制备方法。

本发明还提出一种用于检测耳聋基因突变型与缺失型的引物组。

本发明还提出一种检测胎儿耳聋基因的方法。

本发明还提出一种上述参考品的应用。

根据本发明的第一方面，提出了一种检测耳聋基因的参考品，所述参考品包括片段化的母体基因组DNA和片段化的胎儿基因组DNA。

在本发明的一些实施方式中，所述片段化的母体基因组DNA包括来源于耳聋基因纯合突变、杂合子和阴性母体组织或外周血白细胞的基因组的片段化核酸；所述片段化的胎儿基因组DNA包括来源于耳聋基因纯合突变、杂合子和阴性胎儿组织或外周血白细胞的基因组的片段化核酸。

在本发明的一些实施方式中，所述片段化的母体基因组DNA包括来源于母体组织或外周血的基因组的片段化核酸；片段化的胎儿基因组DNA包括来源于胎儿组织或外周血的基因组的片段化核酸。

在本发明的一些实施方式中，所述耳聋基因突变位点为SLC26A4 c.1174AT位点突变。

在本发明的一些实施方式中，所述片段化的母体基因组DNA的耳聋基因位点突变为野生型、纯合突变或杂合突变；所述片段化的胎儿基因组DNA的耳聋基因位点突变为野生型、纯合突变或杂合突变。