[发明专利]一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法

权利要求书

1.一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法，包括待测样品的制备、糖组分的测定、有机酸组分的测定和结果计算步骤，其特征在于：所述待测样品的制备步骤为：将枇杷果肉研磨成粉，置于超纯水中进行超声辅助提取，枇杷果肉与提取液的重量体积比(g/ml)为1：25-30；超声功率为250-280W，超声频率为40-60kHz，超声辅助提取时间为15-20min；然后在4-6℃、8000-10000rpm离心条件下离心12-15min，取上清液用微孔滤膜过滤既得待测样品；所述糖组分为果糖、葡萄糖和蔗糖；所述有机酸为草酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸和富马酸。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述枇杷选自红肉枇杷或白肉枇杷。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述红肉枇杷为华金无核枇杷；所述白肉枇杷为Q11枇杷。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：研磨前将枇杷果肉置于-80℃冰箱中保存，使用时取出枇杷果肉研磨成粉。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于：枇杷果肉与提取液的重量体积比(g/ml)为1：30。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：超声辅助提取时超声功率为250W，超声频率为40kHz，超声辅助提取时间为15min。

7.如权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：所述糖组分的测定为将待测样品用高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：RID示差检测器；NH₂色谱柱：5μm,4.6mm×150mm；流动相为乙腈：水＝7:3,v/v；流速：0.8mL/min；柱温40℃；RID检测器池温40℃；等度洗脱；进样量10μL。

8.如权利要求1-6任一项所述的方法，其特征在于：所述有机酸的测定为将待测样品用高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：SPD二极管阵列检测器；C₁₈柱：5μm,4.6mm×150mm；流动相为0.02mol/LKH₂PO₄水溶液：甲醇＝90:10,v/v；流速：0.8mL/min；柱温30℃；等度洗脱；进样量10μL。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：有机酸的检测波长为210nm。

10.如权利要求1所述的方法，包括待测样品的制备、糖组分的测定、有机酸组分的测定和结果计算步骤，其特征在于：

(1)所述待测样品的制备步骤为：将枇杷果肉置于-80℃冰箱中保存，使用时取出枇杷果肉研磨成粉，置于超纯水中进行超声辅助提取，枇杷果肉与提取液的重量体积比(g/ml)为1：30；超声功率为250W，超声频率为40kHz，超声辅助提取时间为15min；然后在4-6℃、8000-10000rpm离心条件下离心12-15min，取上清液用微孔滤膜过滤既得待测样品；所述枇杷选自华金无核枇杷或Q11枇杷；

(2)所述糖组分的测定为：将待测样品用高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：RID示差检测器；NH₂色谱柱：5μm,4.6mm×150mm；流动相为乙腈：水＝7:3,v/v；流速：0.8mL/min；柱温40℃；RID检测器池温40℃；等度洗脱；进样量10μL；所述糖组分为果糖、葡萄糖和蔗糖；

(3)所述有机酸组分的测定为：将待测样品用高效液相色谱仪进行检测，色谱条件为：SPD二极管阵列检测器；C₁₈柱：5μm,4.6mm×150mm；流动相为0.02mol/LKH₂PO₄水溶液：甲醇＝90:10,v/v；流速：0.8mL/min；柱温30℃；等度洗脱；进样量10μL；所述有机酸为草酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸和富马酸；

(4)所述结果计算为按照下式计算糖组分和有机酸组分的含量：

果糖的结果计算公式为：y＝74981x-2022.9，其中，x为果糖质量浓度，单位为mg/ml，y为果糖利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

葡萄糖的结果计算公式为：y＝112587x+24716，其中，x为葡萄糖质量浓度，单位为mg/ml，y为葡萄糖利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

蔗糖的结果计算公式为：y＝70534x-6191.6，其中，x为蔗糖质量浓度，单位为mg/ml，y为蔗糖利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积。

草酸的结果计算公式为：y＝2000000x+4417.4，其中，x为草酸质量浓度，单位为mg/ml，y为草酸利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

酒石酸的结果计算公式为：y＝7000000x+37989，其中，x为酒石酸质量浓度，单位为mg/ml，y为酒石酸利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

苹果酸的结果计算公式为：y＝2000000x+2079.6，其中，x为苹果酸质量浓度，单位为mg/ml，y为苹果酸利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

柠檬酸的结果计算公式为：y＝476450x+173.24，其中，x为柠檬酸质量浓度，单位为mg/ml，y为柠檬酸利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

琥珀酸的结果计算公式为：y＝649953x-320.12，其中，x为琥珀酸质量浓度，单位为mg/ml，y为琥珀酸利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积；

富马酸的结果计算公式为：y＝90000000x+9836.1，其中，x为富马酸质量浓度，单位为mg/ml，y为富马酸利用高效液相色谱仪进行检测出的色谱图峰面积。