[发明专利]一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法

说明书

本发明提供一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法，该方法将枇杷果实研磨成粉后，置于超纯水中进行超声辅助提取，离心后进行提取上清液，将上清液用滤膜过滤作为检测样品；然后将所得样品用HPLC进行糖组分和有机酸检测。本发明一次性提取枇杷果实中糖组分和有机酸，并用HPLC精准且快速定量测定枇杷果实中的3种糖组分(果糖、葡萄糖和蔗糖)和6种有机酸(草酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸和富马酸)，提取方法简单，无需繁琐的提取步骤，同时检测时间短，检测限、精密度和回收率方面的效果优良，具有明显的技术进步。

技术领域

本发明属于生物农业技术领域，具体涉及一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法，可以实现果实品质的快速定量分析和鉴定。

背景技术

枇杷(Eriobotryajaponica Lindl.)是蔷薇科、枇杷属植物，是多年生木本常绿小乔木，高可达10米；小枝粗壮，黄褐色，密生锈色或灰棕色绒毛。枇杷起源于我国，已有上千年的栽培历史。它的果实成熟于春末夏初的水果淡季，是我国重要的经济果树。

糖和有机酸是枇杷果实食用品质的核心，不同糖组分不仅决定枇杷果实甜度，也是色素、氨基酸、维生素和芳香物质等其他营养成分合成的基础原料。枇杷果实有机酸常被用作抗氧化和防腐的添加剂，也会影响枇杷果实其他有机成分的性质和含量。在枇杷果实的糖和有机酸含量测定中，高效液相色谱(HPLC)法因为分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高的优点而被广泛使用。然而，现有技术中使用HPLC法测定枇杷果实中糖和有机酸含量时存在样品提取步骤繁琐、溶剂耗费量大、分离时间长、分离物质种类少等缺陷。比如，《4个枇杷品种果实糖组分含量及其分布研究》中需要将糖和有机酸分开提取，且在提取中需经过研磨、溶解、真空抽滤、再溶解等步骤，操作较繁琐且耗费试剂。又比如《OrganicAcidsand Sugar Compositions ofSome Loquat Cultivars(EriobotryajaponicaL.)GrowninTurkey》，提取方法较简单，可提取枇杷果实中5种有机酸，但需要分两次提取。即使是其他水果，对糖和有机酸的提取同样存在操作繁琐且耗费试剂的情形，比如《Determinationofsugars,organic acids,aroma components and carotenoids in grapefruitpulps》，虽然能一次性提取葡萄柚果实中的糖和有机酸，但需先用酒精溶解，经过真空蒸发酒精后，再用超纯水溶解，最后离心提取上清液用于检测。

综上，现有技术在单独测定枇杷果实的糖组分和有机酸方面已比较成熟，但对不同糖组分和有机酸的同时测定上还存在以下问题：检测物质种类少、样品处理繁琐、难以同步定量分析等。本领域亟需一种简单高效的提取枇杷果肉中不同糖组分和有机酸并用HPLC检测的方法。

发明内容

为了解决现有技术中的问题，本发明的目的在于提供一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法，该方法样品制备简单，不需要进行真空抽滤、再溶解或者长时间震荡提取等步骤，且一次性提取制备的样品既可以用于枇杷果实中糖组分(果糖、葡萄糖和蔗糖)的测定，也可以用于枇杷果实中有机酸(草酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸和富马酸)的测定，而且检测过程时间短，具有明显的技术进步。

本发明采用如下技术方案：

一种用HPLC测定枇杷果实中糖和有机酸含量的方法，包括待测样品的制备、糖组分的测定、有机酸组分的测定和结果计算步骤，其特征在于：所述待测样品的制备步骤为：将枇杷果肉研磨成粉，置于超纯水中进行超声辅助提取，枇杷果肉与提取液的重量体积比(g/ml)为1：25-30；超声功率为250-280W，超声频率为40-60kHz，超声辅助提取时间为15-20min；然后在4-6℃、8000-10000rpm离心条件下离心12-15min，取上清液用微孔滤膜过滤既得待测样品；所述糖组分为果糖、葡萄糖和蔗糖；所述有机酸为草酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸和富马酸。

上述方法中，所述枇杷选自红肉枇杷(华金无核)或白肉枇杷(Q11)。