[发明专利]一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法及其应用

权利要求书

1.一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，收集培养得到的表达含组氨酸标签的酶的菌株，用pH 5-9的缓冲液A重悬至10-30 OD后，超声破碎仪破碎，离心去除杂质，得到粗酶液；

步骤2，将粗酶液置于缓冲液B中配置成浓度为0.5-2.0g/l的粗酶液，搅拌均匀，加入20-80mmol/l的二价金属离子溶液B，继续搅拌，洗涤后，冻干得酶粉；

步骤3，取步骤2中酶粉5-20mg溶于去离子水中，加入高分子聚合物溶液，搅拌均匀，加入二价金属离子溶液A和二甲基咪唑溶液，继续搅拌，洗涤后，冻干得到所需纯化并固定化的蛋白粉，所述高分子聚合物：二价金属离子溶液A：二甲基咪唑溶液的摩尔比为7：100：400。

2.根据权利要求1所述的一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法，其特征在于，步骤1中缓冲液A的pH为7.0-7.2，缓冲液A为Tris-盐酸缓冲液。

3.根据权利要求1所述的一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法，其特征在于，步骤1中所述含组氨酸标签的酶的菌株为含组氨酸标签的α-碳酸酐酶或含组氨酸标签的L-赖氨酸脱羧酶。

4.根据权利要求1所述的一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法，其特征在于，步骤1中超声破碎仪的功率为300W，破碎过程为间歇式破碎。

5.根据权利要求1所述的一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法，其特征在于，步骤2中缓冲液B为Tris-盐酸缓冲液，粗酶液的终浓度为1g/l，二价金属离子溶液B为终浓度为40mM的钴离子溶液，搅拌时间为30 min。

6.根据权利要求1所述的一种利用二价金属离子与组氨酸标签纯化并固定化蛋白的方法，其特征在于，步骤3中酶粉溶解后酶液的终浓度为0.5 g/l，高分子聚合物为MW 10000的聚乙烯吡咯烷酮，终浓度为35 mg/ml，金属离子A为钴离子、铜离子或锌离子，且终浓度为50mM，二甲基咪唑的终浓度为200mM，搅拌时间为30min。

7.基于权利要求1所得纯化并固定化的蛋白粉在催化L-赖氨酸降解上的应用。