[发明专利]一种检测脂质加氧氧化产物的方法

权利要求书

1.一种检测脂质加氧氧化产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、制备内标样品：配制成终浓度为100μg/mL的混合内标工作液；所述混合内标工作液的制备方法为：选用三酰甘油17:0/17:0/17:0；磷脂酰胆碱17:0/17:0；磷脂酰乙醇胺17:0/17:0作为内标，分别配制成终浓度为100μg/mL的混合内标工作液；

S2、制备脂质氧化样品：取待测的脂质标准品氧化样品，按9:1v/v的比例加入甲醇和所述混合内标工作液复溶，配制为0.5mg/mL样品，在4-10℃、转速8000-12000转条件下离心10min后，取上清得到脂质氧化样品；

S3、样品测定：将步骤S2制得的所述脂质氧化样品进行高分辨质谱非靶向检测，得到样品中各种化合物的质谱图和色谱图；

S4、推测存在的脂质加氧氧化产物，计算相应化合物的相对分子质量、每种脂质加氧氧化产物的准分子离子质荷比和特征碎片离子质荷比；

S5、根据计算的脂质加氧氧化产物的准分子离子质荷比，在非靶向检测数据中搜索对应化合物，核对是否含有特征碎片离子的质荷比，以此鉴别脂质加氧氧化产物；

步骤S5中根据特征碎片离子鉴别脂质加氧氧化产物的方式是：在MSDIAL中勾选显示具有二级质谱图的化合物；根据推测的氧化产物准分子离子的质荷比，从这些化合物中找到相应物质，将该物质导出到MSFINDER中查看质谱图，核对是否存在特征碎片离子，所述存在特征碎片离子的物质被确定为正确的加氧氧化产物；

步骤S4中脂质加氧氧化产物的准分子离子质荷比计算公式：

m_{准分子离子}＝m_氧化产物+m_加合离子(+H,+Na,+NH4,-H,+CI,+HCOO)；

步骤S4中所述特征碎片离子质荷比计算公式：

负离子模式m_特征离子＝m_{氧化后脂肪酸链}-m_{氢原子质量}

正离子模式m_特征离子＝m_氧化产物-m_{氧化后脂肪酸链}+m_加合离子(+H,+Na,+NH4)。

2.根据权利要求1所述检测脂质加氧氧化产物的方法，其特征在于，步骤S3中的所述高分辨质谱非靶向检测方法为：

采用ACQUITY UPLC BEH C8 2.1x100mm 1.7μm色谱柱,通过超高效液相色谱与混合四极杆-轨道离子阱质谱测定。

3.根据权利要求1所述检测脂质加氧氧化产物的方法，其特征在于，步骤S3中所述高分辨质谱非靶向检测的条件为：

进样量：1μL；采集模式：Full MS+PRM；

流动相：流动相A：乙腈/水60:40，v/v 0.1％甲酸铵；

流动相B：异丙醇/乙腈90:10，v/v 0.1％甲酸铵；

洗脱流速：0.6mL/min；

洗脱梯度：0-2min，15-30％B和2-2.5min，30-48％B；2.5-11min，48-82％B；11-11.5min，82-99％B；11.5-12min，99％B；12-12.1min，99-15％B；12.1-15min，15％B；

质谱采用电喷雾离子源ESI；正离子模式和负离子模式进行检测；采集范围：120-1200m/z；在正模式：鞘气流量为60％，辅助气流量为25％，吹扫气流量为2％；

喷雾电压为3.6kV，毛细管温度为380℃，辅助气体加热器温度为370℃；负模式与正模式类似，喷雾电压为3.0kV。