[发明专利]一种检测脂质加氧氧化产物的方法

说明书

本发明提供一种检测脂质加氧氧化产物的方法，包括以下步骤：准备待测脂质标准品氧化样品；液相色谱串联高分辨质谱非靶向检测氧化油脂样品，获取样品中化合物信息；依照脂质氧化机理推测可能的加氧氧化产物，根据加氧氧化产物在质谱中的加合离子和碎裂规律计算其准分子离子和特征碎片离子的质荷比；在非靶向数据中搜索、核对并确定相应物质，从而确定氧化油脂标准品样品中的脂质加氧氧化产物及其含量。本发明针对脂质标准品氧化研究，根据脂质氧化机理和氧化产物在质谱中碎裂规律，并结合高分辨质谱的非靶向检测，开发了通过质谱图鉴别脂质氧化产物的方法，可实现全面地检测氧化脂质标准品样品中存在的众多低丰度脂质加氧氧化产物。

技术领域

本发明涉及脂质加氧氧化产物检测领域，更具体地说，涉及一种结合高分辨质谱检测低含量脂质加氧氧化中间产物的方法。

背景技术

现有脂质氧化研究多采用硫氰酸铁法，总羰基化合物测定法，碘量法、硫代巴比妥酸法等方法检测脂质氧化进程，但这些监测方式只能评价脂质氧化总体状况，很难用于更精确的氧化研究，如不同结构、不同类别的脂质氧化机理研究。油脂标准品氧化是近年来常用的脂质氧化机理研究的方式，研究多利用气相色谱质谱联用技术监测脂质氧化下游挥发性产物变化，但对于直接参与脂质氧化链式反应的脂质氧化中间产物的研究较少。

由于脂质氧化中间产物种类繁多，普通的靶向监测方式很难全面监测脂质氧化产物，因此对脂质氧化中间产物的研究较少。非靶向检测的数据量庞大，一般Q Exactive HF-X质谱仪每次检测可以获得5000-6000个有二级质谱图的化合物，解释和鉴别这些化合物，现有方法一般采用谱库匹配，然而脂质加氧氧化产物的谱库现在几乎没有，因此现如今非靶向检测仍然很少运用于脂质加氧氧化产物检测。近年来，高分辨质谱的出现让脂质氧化中间产物的全面检测成为可能。高分辨质谱的非靶向检测可以全面检测脂质氧化产物。然而脂质氧化中间产物含量较低，纯品较少，没有丰富的脂质氧化中间产物谱库，因此，注释脂质氧化的非靶向数据十分困难。所以，为了发挥高分辨质谱非靶向检测的优势，有必要开发一种用于解释质谱数据和鉴别脂质氧化产物的方法。

发明内容

为了解决现有技术的监测方式只能评价脂质氧化总体状况，很难用于更精确的例如不同结构、不同类别的脂质氧化机理研究的问题，实现对脂质加氧氧化产物全面的检测。

本发明提供了一种检测脂质加氧氧化产物的方法，具体步骤如下：

S1、制备内标样品：配制成终浓度为100μg/mL的混合内标工作液；

S2、制备脂质氧化样品：取待测的脂质标准品氧化样品，按9:1(v/v)的比例加入甲醇和所述混合内标工作液复溶，配制为0.5mg/mL样品，在4-10℃、转速8000-12000转条件下离心10min后，取上清得到脂质氧化样品；

S3、样品测定：将步骤S2制得的所述脂质氧化样品进行高分辨质谱非靶向检测，得到样品中各种化合物的质谱图和色谱图；

S4、推测存在的脂质加氧氧化产物，计算相应化合物的相对分子质量、每种脂质加氧氧化产物的准分子离子质荷比和特征碎片离子质荷比；

S5、根据计算的脂质加氧氧化产物的准分子离子质荷比，在非靶向检测数据中搜索对应化合物，核对是否含有特征碎片离子的质荷比，以此鉴别脂质加氧氧化产物。

其中，步骤S1中所述混合内标工作液的制备方法为：选用三酰甘油(TG；17:0/17:0/17:0)；磷脂酰胆碱(PC；17:0/17:0)；磷脂酰乙醇胺(PE；17:0/17:0)作为内标，分别配制成终浓度为100μg/mL的混合内标工作液。

其中，步骤S3中的所述高分辨质谱非靶向检测方法为：采用ACQUITY UPLC BEH C8(2.1x100mm 1.7μm)色谱柱,通过超高效液相色谱与混合四极杆-轨道离子阱质谱测定。

其中，步骤S3中所述高分辨质谱非靶向检测的条件为：