[发明专利]一种定量检测血清中维生素B12的方法及预处理试剂盒

权利要求书

1.一种定量检测血清中维生素B12的方法，其特征在于，所述维生素B12包括：氰钴胺、甲钴胺、羟钴胺、腺苷钴胺；所述方法包括：采用体积比为8~10:1的甲醇和异丙醇混合溶液沉淀、氮吹复溶的方法对血清样本进行预处理；配制氰钴胺、甲钴胺、羟钴胺、腺苷钴胺的对照品溶液；将预处理后的血清样本和配制的对照品溶液进行HPLC－MS/MS检测；液相色谱的色谱柱为飞诺美 Kinetex F5色谱柱，2.1 mm ×100 mm，2.7μm；液相色谱的流动相A为含0.1-0.2%甲酸的水溶液；流动相B为含0.1-0.2%甲酸的甲醇溶液；液相色谱的梯度洗脱程序为：0～1.0 min，1 % B，3.0～6.0 min，98 % B，6.5～9 min，1 % B；柱温为35-45 ℃；流速为0.3-0.5 mL/min；质谱条件为：采用电喷雾ESI源正离子方式，离子源温度500-600℃，正离子电压3000-4000 V。

2.如权利要求1所述的定量检测血清中维生素B12的方法，其特征在于，血清样本预处理的步骤为：取血清样品加入内标溶液后再加入甲醇和异丙醇混合溶液，上清溶液用氮气吹干，用甲醇溶液复溶，复溶后转入进样板，进行HPLC－MS/MS分析。

3.如权利要求2所述的定量检测血清中维生素B12的方法，其特征在于，所述内标溶液为氰钴胺－d7溶液。

4.如权利要求1所述的定量检测血清中维生素B12的方法，其特征在于，所述甲醇：异丙醇体积比为9:1。

5.如权利要求2所述的定量检测血清中维生素B12的方法，其特征在于，所述复溶用甲醇溶液为体积百分数为40-60%的甲醇水溶液。

6.如权利要求1所述的定量检测血清中维生素B12的方法，其特征在于，对照品溶液的配制：氰钴胺标准品和羟钴胺标准品分别用水溶解配制成储备液；甲钴胺标准品和腺苷钴胺标准品分别用甲醇溶解配制成储备液。