[发明专利]一种绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷及其分离和应用

说明书

本发明提供了一种绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷化合物及其分离方法。实验表明，分离的8个达玛烷型三萜皂苷化合物均能显著延长小鼠抗常压密闭缺氧、亚硝酸钠缺氧的时间，降低急性缺氧的死亡率，具有较好的抗缺氧作用；能显著延长小鼠在转棒上掉落的时间，延长小鼠负重游泳时间，具有较好的抗疲劳作用；低氧会导致小鼠的认知功能障碍，通过水迷宫实验发现绞股蓝活性部位预处理会在一定程度上保护小鼠的学习认知能力，因此可用于制备抗疲劳、抗耐氧缺、改善学习认知药物中。

技术领域

本发明涉及一种绞股蓝活性部位及其主要活性成分的分离，尤其涉及一种具有抗疲劳、抗缺氧和改善学习认知功能的绞股蓝活性成分达玛烷型三萜皂苷及其分离方法，属于植物有效成分分离领域和医药保健领域。

背景技术

绞股蓝（Gynostemmapentaphyllum(Thunb.) Makino），为葫芦科、绞股蓝属草质攀援植物，全草入药，收录于2015版《中国药典》之“成方制剂中未收载的药材和饮片”部分。绞股蓝具有延缓衰老、抗癌、改善脑力活动、提高大脑机能、增强人体免疫力、调节内分泌、降低胆固醇和转氨酶、抑制溃疡、缓解紧张、镇静、镇痛等功效，民间称其为“不老长寿药草”。

绞股蓝皂苷是绞股蓝的主要活性成分，绞股蓝含有与人参皂苷类似的达玛烷型三萜皂苷类天然产物。绞股蓝是除五加科人参属植物之外，唯一含有人参皂苷的植物，且优良植株中人参皂苷含量甚至高于人参，但绞股蓝化学成分和生物活性的研究远没有人参系统。目前绞股蓝的研究均为绞股蓝提取物或绞股蓝总皂苷，对于该提取物中功能活性部位的制备和活性评价未见报道。

发明内容

本发明目的在于提供一种绞股蓝抗疲劳、抗缺氧和改善学习认知功能的活性部位进行分离，并获得8个新化合物活性成分，同时对活性部位和活性成分进行了抗疲劳、抗缺氧和改善学习认知功能评价。

一、活性部位及活性成分的制备

（1）将干燥绞股蓝粉碎，用其5-20倍量水或70%乙醇-水加热回流提取3次，每次1-2小时，提取液合并，浓缩至无醇味，用大孔吸附树脂洗脱，得到绞股蓝活性部位，标记为JB2020。

（2）将绞股蓝活性部位JB2020溶解在水中，分别用石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到乙酸乙酯相和正丁醇相。

（3）乙酸乙酯相用硅胶柱分离，氯仿-甲醇（70:1~10:1，v/v）梯度洗脱，得到7个部位Fr. A~ Fr. G。

Fr. D液相分离（甲醇/水= 85/15，v/v为流动相，流速为 10 mL/min；色谱柱型号为Daisogel C18柱，色谱柱长度×直径为 250 mm × 20 mm），依次得到化合物1（出峰时间：37 min）、化合物2（出峰时间39 min）和化合物3（出峰时间57 min）。

Fr. G液相分离（甲醇/水= 88/12，v/v为流动相，流速为 10 mL/min；色谱柱型号为Megres C18柱，色谱柱长度×直径为 250 mm × 20 mm），得到化合物8（出峰时间13min）。

（4）正丁醇相溶解在1M H₂SO₄的水溶液中，加热回流6小时，反应结束后用NaHCO₃饱和水溶液中和，浓缩液用硅胶柱分离，氯仿-甲醇（20:1~2:1，v/v）梯度洗脱，依次得到3个部位Fr. A~Fr. C；Fr. B 用 C18 反相硅胶柱分离，甲醇/水（50:50~100:0，v/v）梯度洗脱，依次得到5个部位 Fr. 1~Fr. 5。

部位Fr.1液相分离（甲醇/水= 79/21，v/v为流动相，流速为 10 mL/min；色谱柱型号为Megres C18柱，色谱柱长度×直径为 250 mm × 20 mm），得到化合物6（出峰时间79min）；