[发明专利]一种高效降解氨基甲酸乙酯的农杆菌及其应用

权利要求书

1.一株农杆菌DL-DNH01，分类命名为根瘤土壤杆菌（Agrobacterium tumefaciens），其特征在于：保藏编号CGMCC No.21308。

2.一种利用权利要求1所述农杆菌DL-DNH01制备降解剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、将农杆菌DL-DNH01进行活化，在28-32℃、100-200 rpm条件下恒温振荡培养18-36h；然后按10%-20%接种量接种，在20-35℃、100-200 rpm条件下恒温振荡培养18-36 h，得到种子液；

S2、将所述种子液按10%-20%接种量接种于发酵装置中，在20-35℃、通气量0.6-1.0 m³/min，搅拌速率100-200 rpm条件下，发酵至菌体数量1×10⁹-6×10⁹ CFU/mL，得到DL-DNH01发酵产物；

S3、将所述DL-DNH01发酵产物制成微胶囊。

3.根据权利要求2所述制备降解剂的方法，其特征在于，步骤S3中所述微胶囊的制备方法包括：

S1、取壳聚糖溶解在质量分数为1.0%的醋酸溶液中，然后加入终浓度1.0%的CaCl₂，搅拌溶解，得到壳聚糖氯化钙混合溶液；

S2、配制2.5%质量浓度的海藻酸钠溶液，并将所述DL-DNH01发酵产物组分按1：1比例溶于其中；

S3、再以2-10滴/秒的速度滴加至所述壳聚糖氯化钙混合溶液中，边滴加边搅拌，滴加结束后，继续搅拌0.5 h，过滤后用PBS洗涤1-2次，收集微胶囊。

4.根据权利要求3所述微胶囊的制备方法，其特征在于，所述微胶囊湿润状态下粒径为3-5mm。

5.根据权利要求2所述制备降解剂的方法，其特征在于，步骤S2中所述DL-DNH01发酵产物为：DL-DNH01含菌发酵液、DL-DNH01发酵液上清、DL-DNH01菌体悬液或DL-DNH01细胞裂解液；

所述DL-DNH01含菌发酵液由所述DL-DNH01发酵产物经干燥，用去离子水回调至原体积的1/20制成；所述DL-DNH01发酵液上清由所述DL-DNH01发酵产物在4000g转速下离心10min并收集发酵液上清，经干燥处理，用去离子水回调至原体积的1/20制成；所述DL-DNH01菌体悬液由所述DL-DNH01发酵产物在4000g转速下离心10 min并收集菌体沉淀物，稀释至浓度20 OD得到；所述DL-DNH01细胞裂解液由所述DL-DNH01菌体悬液经过细胞破壁得到。

6.根据权利要求5所述制备降解剂的方法，其特征在于，所述干燥为冷冻真空干燥。

7.一种权利要求1所述农杆菌或其发酵产物的应用，其特征在于，该农杆菌DL-DNH01及其发酵产物用于降解氨基甲酸乙酯；

DL-DNH01发酵产物为：DL-DNH01含菌发酵液、DL-DNH01发酵液上清、DL-DNH01菌体悬液或DL-DNH01细胞裂解液；

DL-DNH01含菌发酵液由DL-DNH01发酵产物经干燥，用去离子水回调至原体积的1/20制成；DL-DNH01发酵液上清由DL-DNH01发酵产物在4000g转速下离心10 min并收集发酵液上清，经干燥处理，用去离子水回调至原体积的1/20制成；DL-DNH01菌体悬液由DL-DNH01发酵产物在4000g转速下离心10 min并收集菌体沉淀物，稀释至浓度20 OD得到； DL-DNH01细胞裂解液由DL-DNH01菌体悬液经过细胞破壁得到。

8.根据权利要求7所述农杆菌或其发酵产物的应用，其特征在于，用于酒精饮料中氨基甲酸乙酯的降解。

9.根据权利要求7所述农杆菌或其发酵产物的应用，其特征在于，用于发酵食物中氨基甲酸乙酯的降解。