[发明专利]放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法及核酸检测装置

权利要求书

1.一种连接扩增放大微量DNA并用于下游多种核酸检测的方法，其特征在于，所述方法包括：

提供DNA样本变性形成单链DNA并经多聚核苷酸激酶处理得到修饰的单链DNA；

对所述单链DNA进行保守序列接头连接，以获得第一产物；

对所述第一产物进行纯化处理以得到第二产物；

对所述第二产物进行扩增处理以得到第三产物；

使用所述第三产物进行下游核酸检测；所述核酸检测包括测序、PCR、qPCR、ddPCR、飞行质谱处理、芯片检测和甲基化检测等核酸检测中的任意一种或多种。

2.根据权利要求1所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述对所述单链DNA进行保守序列接头连接包括：

通过退火配对形成第一接头和第二接头；

将同一反应试管的所述单链DNA加入连接酶、第一接头以及等量的第二接头；

加入连接缓冲液，加水补足体积后进行连接酶反应；

等待所述连接酶反应完成，实现所述单链DNA连接第一接头和第二接头。

3.根据权利要求1所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述对所述单链DNA进行保守序列接头连接包括：

通过退火配对形成第一接头和第二接头；

在同一反应试管的所述单链DNA加入连接酶、第一接头以及连接缓冲液，加水补足体积后进行连接酶反应，得到反应完成后的第一接头连接混合物；

对所述第一接头连接混合物进行纯化后再加入连接酶、第二接头以及连接缓冲液，加水补足体积后进行连接酶反应；

等待所述连接酶反应完成，实现所述单链DNA连接第一接头和第二接头。

4.根据权利要求3所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，对所述第一接头连接混合物使用引物进行单链延伸形成双链DNA或者进行扩增形成单链产物，再对所述双链DNA进行连接或对所述单链产物进行连接。

5.根据权利要求2或3所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述第一接头和第二接头浓度均为1μM-100μM，存储于-20℃冰箱。

6.根据权利要求2或3所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述连接酶包括但不限于T4 DNA连接酶、T4 RNA ligase、CircLigase、Taq DNA Ligase、E.coli DNA Ligase和Ampligase中的任意一种或任意几种组合；所述连接酶的终浓度为0.1U/μL～100U/μL。

7.根据权利要求1所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述扩增处理按照放大扩增反应及选择的扩增酶反应条件进行扩增，并引入匹配所述第一接头和第二接头的引物对。

8.根据权利要求7所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述放大扩增反应包括聚合酶链式反应PCR方法或者等温扩增方法；所述扩增酶反应选择高保真酶，所述高保真酶选择无扩增偏向性的扩增酶。

9.根据权利要求1所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法，其特征在于，所述第三产物在进行核酸检测前还包括：

对所述第三产物进行纯化处理。

10.一种核酸检测装置，其特征在于，所述核酸检测装置包括如权利要求1至9任一项所述的放大微量DNA并用于多种核酸检测的方法。