[发明专利]一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法在审
申请号: | 202110356294.1 | 申请日: | 2021-04-01 |
公开(公告)号: | CN113201555A | 公开(公告)日: | 2021-08-03 |
发明(设计)人: | 胡懋;曾杨璇;杨正凤;张榕;赵元昊;者园园;黄遵锡 | 申请(专利权)人: | 云南师范大学 |
主分类号: | C12N15/82 | 分类号: | C12N15/82;C12N15/65 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 刘妮 |
地址: | 650500 云*** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 含有 egfp 标记 霉素 抗性 载体 构建 方法 | ||
1.一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
1)构建潮霉素表达盒与经EcoR I、xbal酶切后线性化pCAMBIA3301质粒连接得到潮霉素抗性双元质粒;
2)以pCT74为模板扩增得到,构建含有eGFP标记基因的表达盒;
3)将步骤1)的潮霉素抗性双元质粒与步骤2)含eGFP标记基因的表达盒无缝克隆连接。
2.根据权利要求1所述的一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法,其特征在于,以质粒pAN7-1为模板,利用如SEQ ID NO.1~2所示引物获得潮霉素表达盒gpdA-HygR-trpC。
3.根据权利要求1所述的一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法,其特征在于,所述的含eGFP标记基因的表达盒包括gpdA-eGFP-trpC和glaA-eGFP-trpC。
4.根据权利要求3所述的一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法,其特征在于,所述的表达盒gpdA-eGFP-trpC中,获得各片段的引物依次如SEQ ID NO.3~8所示。
5.根据权利要求3所述的一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法,其特征在于,所述的表达盒glaA-eGFP-trpC中,获得各片段的引物依次如SEQ ID NO.9~14所示。
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