[发明专利]鉴别呼伦贝尔短尾羊纯合杂合子的PCR-RFLP方法及引物

权利要求书

1.一种鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体PCR-RFLP法所用引物，其特征在于：所述引物序列如下：

BrachyuryFX-F:5’-TGCGCCCCTTCCTTTTCAG-3’

BrachyuryFX-R:5’-GGGGGAGTCGGGGTGGATGTAG-3’。

2.一种鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：

其操作步骤为：

步骤1)以样本基因组DNA为模板扩增Brachyury/T基因的区间序列得到扩增基因片段，所用引物为权利要求1所述序列引物；

步骤2)使用琼脂糖凝胶回收试剂盒或PCR产物回收试剂盒对步骤1)所得扩增产物进行回收纯化；

步骤3)对步骤2)所得纯化产物进行酶切；

步骤4)将步骤3)所得酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳并观察结果。

3.根据权利要求2所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述步骤1)扩增基因片段长度为203bp，PCR反应条件为：95℃3min；95℃15s，65℃15s，72℃12s，共30个循环，72℃5min。

4.根据权利要求3所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述步骤3)使用BciT130 I进行酶切，酶切体系为：步骤2)所得纯化产物1μg、Bci T130 I1μl、10X K Buffer 2μl、无菌水补齐体系至20μl，酶切温度为37℃，反应时间为1-1.5小时，酶切完成后，将酶切产物迅速置于冰上冷却。

5.根据权利要求4所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述酶切的反应时间为1.5小时。

6.根据权利要求2-5任一项所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述步骤4)中琼脂浓度为1％-1.5％。

7.根据权利要求6所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述引物BrachyuryFX-F、BrachyuryFX-R为Page纯化，工作浓度为10μM。

8.根据权利要求7所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述引物工作浓度为10ng/μl。

9.根据权利要求6所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述样本基因组DNA的浓度为80-120ng/μl。

10.根据权利要求9所述鉴别呼伦贝尔短尾羊纯杂合个体的PCR-RFLP方法，其特征在于：所述样本基因组DNA的浓度应为100ng/μl。