[发明专利]一种快速检测肠杆菌β-内酰胺酶的方法

权利要求书

1.一种快速检测肠杆菌β-内酰胺酶的方法，包括：

样品处理：挑取单个菌落，悬浮在缓冲液中，超声处理，超滤离心去除缓冲液，然后进行酶切，得到肽段；

反相色谱分离：用反相色谱柱分离肽段，流动相A为包含甲酸的水溶液，流动相B为流动相A与乙腈的混合物；和

质谱法检测β-内酰胺酶的特异性肽段，

其中所述特异性肽段为选自以下的一种或几种：

LVVPSHSEVGDASLLK；

VQATNSFSGVNYWLVK；

NSFGGVNYWLVK；

LDEGVYVHTSFEEVNGWGVVPK；

LAEAEGNEIPTHSLEGLSSSGDAVR；

DGDELLLIDTAWGAK；

NNGLTEAWLESSLK；

IINHNLPVK；

ADIANNHPVTQQTLFELGSVSK；

TLQQGIALAQSR；

QLTLGHALGETQR；

TEPTLNTAIPGDPR；

LIAQLGGPGGVTAFAR；

APLILVTYFTQPQPK；

SDLVNYNPIAEK；和

VGYIELDLNSGK。

2.一种快速检测肠杆菌β-内酰胺酶的方法，包括：

样品处理：挑取单个菌落，悬浮在缓冲液中，超声处理，超滤离心去除缓冲液，然后进行酶切，得到肽段；

反相色谱分离：用反相色谱柱分离肽段，流动相A为包含甲酸的水溶液，流动相B为流动相A与乙腈的混合物；和

质谱法检测β-内酰胺酶的特异性肽段和同位素标记的特异性肽段，

其中所述特异性肽段为选自以下的一种或几种：

LVVPSHSEVGDASLLK；

VQATNSFSGVNYWLVK；

NSFGGVNYWLVK；

LDEGVYVHTSFEEVNGWGVVPK；

LAEAEGNEIPTHSLEGLSSSGDAVR；

DGDELLLIDTAWGAK；

NNGLTEAWLESSLK；

IINHNLPVK；

ADIANNHPVTQQTLFELGSVSK；

TLQQGIALAQSR；

QLTLGHALGETQR；

TEPTLNTAIPGDPR；

LIAQLGGPGGVTAFAR；

APLILVTYFTQPQPK；

SDLVNYNPIAEK；和

VGYIELDLNSGK，

上述特异性肽段下划线标记为同位素标记位点。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述单个菌落的直径＞2mm。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中用蛋白酶进行酶切，优选采用胰蛋白酶，最优选采用测序级胰蛋白酶进行酶切。

5.根据权利要求4所述的方法，其中使用C18柱分离肽段。

6.根据权利要求5所述的方法，其中流动相A为包含0.1％甲酸的水溶液，流动相B为含0.1％甲酸的80％乙腈。

7.根据权利要求6所述的方法，其中洗脱为梯度洗脱。