[发明专利]一种帕金森病伴发抑郁细胞模型及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法，其特征在于，所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法包括：

步骤一，获取SH-SY5Y细胞，将获取的SH-SY5Y细胞在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得SH-SY5Y细胞悬液；

步骤二，将得到的SH-SY5Y细胞悬液接种于6孔板中，并利用极低频脉冲电磁场对SH-SY5Y神经细胞进行刺激培养一段时间；

步骤三，步骤二培养得到的SH-SY5Y细胞在含有多聚赖氨酸以及全反式维甲酸的培养基中进行诱导培养后，并利用D-Hanks’液清洗2遍；

步骤四，向孔内加入包含6-OHDA与皮质酮的无FBS的DMEM培养液，边对培养基中的细胞进行电处理边孵育即可得所述帕金森病伴发抑郁细胞模型；

步骤一中，所述，将获取的SH-SY5Y细胞在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得SH-SY5Y细胞悬液包括：

(1)将SH-SY5Y细胞放置于基础培养基中在35-38℃、4.5-6.5％的CO₂、饱和湿度下进行培养；

(2)待细胞长满细胞培养板后，利用0.3％的胰酶消化后进行离心；收集细胞，正常DMEM培养液重悬，即可得到H-SY5Y细胞悬液；

所述利用极低频脉冲电磁场刺激SH-SY5Y神经细胞包括：

采用信号频率为60Hz、输出电流为0.2A，脉冲电磁场输出频率为60Hz、电流强度为0.2A的脉冲波形刺激SH-SY5Y神经细胞。

2.如权利要求1所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法，其特征在于，所述基础培养基为包含10％胎牛血清、2％双抗以及2％谷氨酰胺的DMEM-F12培养基；所述培养基每28小时更换一次液体。

3.如权利要求1所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤二中，所述接种密度为6×10⁵～8×10⁵/孔。

4.如权利要求1所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法，其特征在于，步骤四中，所述无FBS的DMEM培养液中包含60mM/L的6-OHDA与90μM/L的皮质酮。

5.如权利要求1所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法，其特征在于，所述对培养基中的细胞进行电处理包括：

利用脑深部电磁耦合刺激与电信号检测的探针对培养基中的细胞进行电处理。

6.一种利用如权利要求1-5任意一项所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法构建的帕金森病伴发抑郁细胞模型。

7.一种如权利要求6所述帕金森病伴发抑郁细胞模型在筛选药物中的用途。

8.如权利要求7所述用途，其特征在于，所述用途包括：在筛选改善或治愈帕金森病伴发抑郁的药物中的应用。