[发明专利]一种帕金森病伴发抑郁细胞模型及其制备方法和用途

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了一种帕金森病伴发抑郁细胞模型及其制备方法和用途，包括：获取SH‑SY5Y细胞，将获取的SH‑SY5Y细胞在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得SH‑SY5Y细胞悬液；利用极低频脉冲电磁场对SH‑SY5Y神经细胞进行刺激培养后再进行诱导培养，最后利用6‑OHDA与皮质酮结合电处理诱导得到帕金森病伴发抑郁细胞模型。本发明利用6‑OHDA与皮质酮联合诱导SH‑SY5Y细胞损伤，同时利用探针进行细胞电刺激加深SH‑SY5Y细胞的抑郁程度，全面而整体模拟了PDD的特点，对于PDD的病理生理研究、发病机制研究、体外药物筛选和药物评价等，均具有广泛的意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种帕金森病伴发抑郁细胞模型及其制备方法和用途。

背景技术

目前：帕金森病(Parkinson's disease)，是一种常见的神经系统疾病，帕金森病最主要的病理改变是中脑黑质多巴胺能的变性死亡，由此而引起纹状体多巴胺含量显著性减少而致病。导致这一病理改变的确切病因目前仍不清楚，遗传因素、环境因素、氧化应激等均可能参与帕金森病多巴胺能神经元的变性死亡过程。

帕金森病作为典型运动障碍性疾病，以典型四大运动症状(震颤、肌强直、动作迟缓及姿势平衡障碍)为主要表现。除此之外，大多数患者在病程中会出现非运动症状，尤其是抑郁。帕金森病伴发抑郁（Parkinson’s disease depression，PDD）的发生率为40%~50%，然而，现有技术虽然有构建帕金森或抑郁症的细胞模型，但是并没有帕金森病伴发抑郁的复合细胞模型，帕金森或抑郁症的细胞模型不能全面而整体模拟PDD的特点，只是局限于单病的细胞模型，极大限制了PDD的病理生理研究、发病机制研究、体外药物筛选和药物评价等。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：现有技术没有帕金森病伴发抑郁的复合细胞模型；现有帕金森或抑郁症的细胞模型不能全面而整体模拟PDD的特点，极大限制了PDD的病理生理研究、发病机制研究、体外药物筛选和药物评价等。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种帕金森病伴发抑郁细胞模型及其制备方法和用途。

本发明是这样实现的，一种帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法，所述帕金森病伴发抑郁细胞模型的构建方法包括：

步骤一，获取SH-SY5Y细胞，将获取的SH-SY5Y细胞在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得SH-SY5Y细胞悬液；

步骤二，将得到的SH-SY5Y细胞悬液接种于6孔板中，并利用极低频脉冲电磁场对SH-SY5Y神经细胞进行刺激培养一段时间；

步骤三，步骤二培养得到的SH-SY5Y细胞在含有多聚赖氨酸以及全反式维甲酸的培养基中进行诱导培养后，并利用D-Hanks’液清洗2遍；

步骤四，向孔内加入包含6-OHDA与皮质酮的无FBS的DMEM培养液，边对培养基中的细胞进行电处理边孵育即可得所述帕金森病伴发抑郁细胞模型。

进一步，步骤一中，所述将获取的SH-SY5Y细胞在基础培养基中培养至一定融合度，进行消化，获得SH-SY5Y细胞悬液包括：

（1）将SH-SY5Y细胞放置于基础培养基中在35-38℃、4.5-6.5％的CO₂、饱和湿度下进行培养；

（2）待细胞长满细胞培养板后，利用0.3％的胰酶消化后进行离心；收集细胞，正常DMEM培养液重悬，即可得到H-SY5Y细胞悬液。

进一步，所述基础培养基为包含10％胎牛血清、2％双抗以及2%谷氨酰胺的DMEM-F12培养基；所述培养基每28小时更换一次液体。

进一步，所述利用极低频脉冲电磁场刺激SH-SY5Y神经细胞包括：