[发明专利]一种肽链水解试剂及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种肽链水解试剂，其特征在于，由以下物质组成：盐酸二氧六环溶液、重氧水和二价金属氯化物溶液；其中，所述盐酸二氧六环溶液、所述重氧水和所述二价金属氯化物溶液的摩尔比为(2~4): (35~40): (0.005~0.012)，所述的肽链水解试剂中的肽链含有谷氨酰胺、谷氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸4种氨基酸中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的一种肽链水解试剂，其特征在于，所述盐酸二氧六环溶液中的盐酸的浓度为1.7~2.2mol/L。

3.根据权利要求1所述的一种肽链水解试剂，其特征在于，所述二价金属氯化物溶液中的二价金属离子可选自Mg²⁺、Ca²⁺、Co²⁺、Ni²⁺、Zn²⁺、Cd²⁺、Cu²⁺、Pb²⁺、Ba²⁺、Sr²⁺、Fe²⁺或Sn²⁺。

4.根据权利要求1所述的一种肽链水解试剂的制备方法，其特征在于，包括：

a)将盐酸二氧六环溶液和重氧水混匀，所述盐酸二氧六环溶液和所述重氧水的摩尔比为(2~4)：(35~40)，得到二氧六环盐酸重氧水溶液；

b)在步骤a)中的所述二氧六环盐酸重氧水溶液中加入二价金属氯化物溶液，所述重氧水和所述二价金属氯化物溶液的摩尔比为(35~40): (0.005~0.012)，得到肽链水解试剂。

5.权利要求1所述的肽链水解试剂在氨基酸检测分析的应用，其特征在于，具体方法为：

1)称取多肽或蛋白质样品，加入所述肽链水解试剂，冷冻、抽真空、充入惰性气体后进行加热水解；

2)充分水解后，旋蒸除去溶剂，再用水溶解并将溶液的pH调至6.5~7.5；

3)加入金属螯合剂除去二价金属氯化物中的二价金属离子，离心，得到上清液；

4)对步骤3)的所述上清液进行液相色谱-高分辨质谱分析，得到所述上清液的总离子质量色谱图；

5)提取步骤4)的所述总离子质量色谱图中谷氨酰胺、谷氨酸、天冬酰胺和天冬氨酸水解产物的选择离子质量色谱图，根据所述水解产物的同位素二级碎片离子不相等的特性建立关系式，由所述关系式得到多肽或蛋白质样品中谷氨酰胺和谷氨酸的比值、天冬酰胺和天冬氨酸的比值。

6)分别获得多肽或蛋白质样品中谷氨酸和天冬氨酸的总含量，根据步骤5）得到的所述比值，即可分别计算出多肽或蛋白质样品中谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸的实际含量。

6.根据权利要求5所述的肽链水解试剂在氨基酸检测分析的应用，其特征在于，步骤1)的所述水解的温度为110℃，所述水解的时间为8～24h。

7.根据权利要求5所述的肽链水解试剂在氨基酸检测分析的应用，其特征在于，步骤3)的所述金属螯合剂与所述二价金属离子的质量比为12~24:1。

8.根据权利要求5所述的肽链水解试剂在氨基酸检测分析的应用，其特征在于，步骤5)为配制除谷氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、天冬氨酸外的各个待测氨基酸的不同浓度的混合标准溶液，得到所述混合标准溶液总离子质量色谱图，提取所述混合标准溶液总离子质量色谱图中的所述各个待测氨基酸的选择离子质量色谱图，得到所述各个待测氨基酸的不同浓度对应的峰面积，分别建立所述各个待测氨基酸的峰面积与浓度的标准曲线，得到所述待测氨基酸的峰面积与浓度的线性关系式；

测量多肽或蛋白质样品的总离子质量色谱图，根据多肽或蛋白质样品的总离子质量色谱图相对应的混合标准溶液的总离子质量色谱图的色谱峰位置，获得多肽或蛋白质样品中的待测氨基酸相对应的峰面积，代入相应的所述待测氨基酸的线性关系式，得到多肽或蛋白质样品中的待测氨基酸的实际含量。