[发明专利]棱子芹属植物活性成分制备方法及其在制备抗炎药物中的应用

权利要求书

1.一种伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，其特征在于，先采用醇提对P. candollei进行提取获得粗提物，然后采用高速逆流色谱对粗提物进行分离纯化，高速逆流色谱采用的溶剂系统为正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水两相溶剂系统，使用前分取上相和下相，上相用作固定相，下相用作流动相；

得到以下9种化合物单体：

；

所述高速逆流色谱的分离纯化方法为：先使用体积比为8.5-9.5:1: 8.5-9.5:1的正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水两相溶剂系统对目标组分进行初步分离，得到化合物9、化合物5、化合物8和两组混合物，再使用体积比为6.5-7.5:2.5-3.5: 6.5-7.5:2.5-3.5的正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水两相溶剂系统对化合物1-4的混合物进行二次分离，得到化合物1、化合物2、化合物3和化合物4；使用体积比为8.5-9.5:1: 8.5-9.5:1的正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水两相溶剂系统对化合物6-7的混合物进行循环分离，得到化合物6和化合物7。

2.如权利要求1所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，其特征在于，醇提的步骤为：将P. candollei粉碎，采用乙醇浸泡提取2-4次，合并提取液，真空浓缩得到粗提物。

3.如权利要求2所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，其特征在于，所述乙醇采用体积分数75-95%的乙醇溶液，每次浸泡提取时间为46-50 h。

4.如权利要求1所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，其特征在于，化合物1-4的混合物的分离经过至少五次循环分离；化合物6-7混合组分的分离经过至少四次循环分离。

5.如权利要求1所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，其特征在于，高速逆流色谱分离中，固定相以28-32 mL/min的流速泵入分离柱；流动相的流速为1.9-2.1 mL/min。

6.如权利要求1所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，其特征在于，高速逆流色谱的温度设定为20-30℃，检测器波长设定为254 nm。

7.一种伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的检测方法，其特征在于，包括权利要求1-6任一所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的制备方法，然后采用HPLC-ESI-MS对高速逆流色谱分离的每个组分进行检测。

8.如权利要求7所述的伞形科棱子芹属植物P. candollei中活性成分的检测方法，其特征在于，HPLC分析选择水（A）和乙腈（B）为流动相，梯度条件设置为：0-1 min，90%A，10%B；1-3 min，90%-50%A； 3-7 min，50%-10%A；7-16 min，10%-50%A；16-18 min，10%B；

HPLC的检测波长为254 nm，流速为0.5-1.5mL/min。