[发明专利]一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物，其特征在于，其由胱胺中的氨基通过酰胺化反应与无抗凝活性肝素中的羧基相连后ES2肽的羧基再次通过酰胺化反应与胱胺中游离的氨基结合而成，结构式如下：

GSHP～CYS-(ES2)n；

式中，n＝1～10；GSHP的分子量为3000～8000Da。

2.如权利要求1所述的ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物，其特征在于，所述ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物还修饰有紫杉醇即ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物，具体的，其由胱胺上的氨基通过酰胺键与乙二醇断裂肝素上的羧基相连，紫杉醇的羟基通过酯键与GSHP中的羧基相连以及ES2肽的羧基通过酰胺键与胱胺上的游离氨基连接形成，结构式如下：

(PTX)n₁-GSHP～CYS-(ES2)n₂；

式中，n₁＝1～5，n₂＝1～10，GSHP的分子量为1000Da～8000Da，抗凝活性不高于40％；

优选的，所述n₁＝2，n₂＝10，分子量为3000～8000Da，抗凝活性不高于20％。

3.权利要求1所述的ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物的制备方法，其特征在于，包括：

S1、制备GSHP～CYS结合物：将GSHP溶解于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂活化GSHP中的羧基，活化完成后调节pH至弱碱性，然后缓慢加入CYS溶液进行反应，反应完成后，反应产物经纯化即得GSHP～CYS结合物；

S2、制备GSHP～CYS-ES2结合物：将ES2溶解于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂，活化后，缓慢加入上述GSHP～CYS溶液继续反应，反应结束后，反应产物经纯化后即得GSHP～CYS-ES2结合物。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，调节pH至弱碱性具体为加入碱液调节pH至7.40左右；加入CYS溶液后反应时间控制为8～15h，优选为10h；反应产物纯化步骤包括透析和干燥步骤；或，

所述步骤S2中，活化时间控制为10-60min，优选为45min；缓慢加入GSHP～CYS溶液继续反应，反应时间控制为12～48h，优选为24h；反应产物纯化步骤包括透析、干燥。

5.权利要求2所述的ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物的制备方法，其特征在于，包括：

S1、制备GSHP～CYS结合物：将GSHP溶解于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂活化GSHP中的羧基，活化完成后调节pH至弱碱性，然后缓慢加入CYS溶液进行反应，反应完成后，反应产物经纯化即得GSHP～CYS结合物；

S2、制备GSHP～CYS-TBA结合物：将上述GSHP～CYS溶于双蒸水中，加入Dowex离子交换树脂，搅拌后过滤除去树脂，使用TBA溶液调整GSHP～CYS溶液pH至中性或弱碱性，冻干即得到GSHP～CYS-TBA结合物；

S3、制备PTX-GSHP～CYS结合物：将上述GSHP～CYS-TBA溶于有机溶剂中，添加DCC和DMAP作为催化剂进行催化反应，然后缓慢加入PTX溶液，继续反应，反应结束后，反应产物经纯化后即得PTX-GSHP～CYS结合物；

S4、制备PTX-GSHP～CYS-ES2结合物：具体制备方法为：将ES2溶解于水中，加入EDCI和NHS作为催化剂，以活化羧基，活化后，缓慢加入上述PTX-GSHP～CYS溶液继续反应，反应结束后，反应产物经纯化后即得PTX-GSHP～CYS-ES2结合物。