[发明专利]一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明通过控制相关工艺条件，可以制备得到不同结合度的PTX‑无抗凝活性肝素～CYS‑ES2肽结合物。制备得到的ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物与ES2肽相比，保留了ES2肽抗新生血管生成与抗肿瘤活性，整合了肝素和紫杉醇的抗肿瘤等，使其具有更高的稳定性、亲水性、靶向性等特性，因此具有更好的使用效果和应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物及其制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

内皮抑素(Endostatin,ES)是目前最有效的内源性新生血管生成抑制剂之一，能够有效的抑制机体内的病理性的新生血管的生成过程，具有广谱的抗肿瘤能力，且没有明显的毒性作用。国内外研究学者经过多年努力，发现ES具有自身独特的抗血管生成和抗肿瘤活性。

2005年9月，国家食品药品监督管理局批准了国产新型重组人血管内皮抑素(Endostar，恩度)在国内上市，将其联合化疗药物用于晚期非小细胞肺癌的治疗。ES2(IVRRADRAAVP，SEQ ID NO.1)是ES中的一段由11个氨基酸组成的多肽序列，包含ES中的氨基酸60-70序列和三个表面暴露的精氨酸残基Arg⁶²，Arg⁶³和Arg⁶⁶。ES2具有明显的抗新生血管生成和抗肿瘤活性，更容易进入血管内部且更易获得与改造。但ES2也存在体内半衰期较短和稳定性较差等缺点，其应用受到了很大的限制。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物及其制备方法和应用。本发明通过优化控制反应相关参数和条件，从而成功制备得到具有不同结合度的无抗凝活性肝素～胱胺-ES2肽结合物和/或紫杉醇-无抗凝活性肝素～胱胺-ES2肽结合物，其具有良好的稳定性和生物活性，因此具有良好的实际应用之价值。

为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明的第一个方面，提供一种ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物，其由胱胺中的氨基通过酰胺化反应与无抗凝活性肝素(GSHP)中的羧基相连后ES2肽的羧基再次通过酰胺化反应与胱胺中游离的氨基结合而成，结构式如下：

GSHP～CYS-(ES2)n；

式中，n＝1～10；ES2的分子量为1223Da，GSHP的分子量为3000～8000Da。

进一步的，所述ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物还可联合紫杉醇，具体的，其由胱胺上的氨基通过酰胺键与乙二醇断裂肝素(GSHP)上的羧基相连，紫杉醇的羟基通过酯键与GSHP中的羧基相连以及ES2肽的羧基通过酰胺键与胱胺上的游离氨基连接形成，结构式如下：

(PTX)n₁-GSHP～CYS-(ES2)n₂；

式中，n₁＝1～5，n₂＝1～10，ES2的分子量为1223Da，等电点为10.42，GSHP的分子量为1000Da～8000Da，抗凝活性不高于40％。

优选的，所述n₁＝2，n₂＝10，分子量为3000～8000Da，抗凝活性不高于20％。

本发明的第二个方面，提供上述ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰并联合紫杉醇的结合物的制备方法，包括：

(1)当所述ES2肽的无抗凝活性肝素化修饰物为GSHP～CYS-ES2时，其制备方法为：