[发明专利]一种珊瑚致病菌的益生菌筛选及防治方法

权利要求书

1.一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选方法，其特征在于，该筛选方法包括如下步骤：

(a1)样本选择：采集生长状态良好的健康珊瑚，置于养殖池中适应至少15d；

(a2)菌株培养：将待筛选菌株和目标菌株分别接种于液体培养基中，摇床培养，测定菌株的OD₆₀₀值并制作其生长曲线；

(a3)拮抗实验：将备好的无菌干净的药敏纸片置于待筛选菌株的培养基中，将目标致病菌涂布于MA平板上，再将沾有筛选菌株的药敏纸片置于已涂布有目标致病菌的MA平板上，将平板置于29℃培养箱中培养，定期观察拍照。

(a4)菌株鉴定：当MA平板上药敏纸片周围出现明显抑菌圈时，将对应的筛选的潜在益生菌菌株进行PCR，16srDNA测序，鉴定其种属，选取其中一种作为目标潜在益生菌。

2.根据权利要求1所述的一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，所述目标菌株为致病菌Vibrio coralliilyticus的菌株，该致病菌保藏于海洋微生物菌种保藏管中心，保藏编号为MCCC1A00545。

3.根据权利要求1所述的一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，所述珊瑚为鹿角杯形珊瑚。

4.根据权利要求1所述的一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，步骤(b2)中，若空白组和阴性对照组的珊瑚样本状态优于阳性对照组，且实验组1或实验组2的珊瑚样本状态优于阳性对照组，且检测数据存在显著性差异，表明对珊瑚致病菌防治有效。

5.根据权利要求1所述的一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，所述液体培养基为MA液体培养基。

6.根据权利要求1所述的一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，步骤(b1)中的5组处理，每组处理设有至少3个重复。

7.根据权利要求1所述的一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，所述的潜在益生菌为GXUZ9。

8.一种珊瑚致病菌的潜在益生菌防治方法，其特征在于，该防治方法包括如下步骤：

(b1)菌株培养：将已筛选的目标潜在益生菌(GXUZ9)与目标致病菌分别加入到MA培养基中，培养至平稳期；

(b2)分组处理：将珊瑚株分为五组，每组三株，处理如下：单独添加有海水，作为空白组，单独添加有致病菌，作为阳性对照组，单独添加有潜在益生菌，作为阴性对照组，同时加致病菌与潜在益生菌作为实验组1，提前五小时加潜在益生菌后加致病菌作为实验组2；

(b3)接种观察：将步骤(b1)的5组的单个珊瑚样本分别进行接种处理，期间测定珊瑚样本上的共生虫黄藻密度及光合效率，并观察记录珊瑚样本表观特征；

(b4)防治评估：以步骤(b2)各珊瑚样本表观特征，共生虫黄藻密度，光合速率判断致病菌作用珊瑚样本前后差异为指标，评估珊瑚样本在致病菌作用前后白化程度，若空白组和阴性对照组的珊瑚样本状态优于阳性对照组，且实验组1或实验组2的珊瑚样本状态优于阳性对照组，则表明潜在益生菌对目标致病菌导致的珊瑚疾病防治有效。