[发明专利]一种珊瑚致病菌的益生菌筛选及防治方法

说明书

本发明公开一种珊瑚致病菌的益生菌筛选及防治方法，包括以下步骤：通过拮抗实验筛选针对目标致病菌的潜在益生菌，获得多株针对目标致病菌具有拮抗作用的潜在益生菌，选取其中一种拮抗能力强的潜在益生菌和生长状态良好的珊瑚样本用于珊瑚致病菌防治实验。通过比较单独添加有海水，单独添加有致病菌，单独添加有益生菌，同时加致病菌与益生菌，提前五小时加益生菌后加致病菌，将海水、目标致病菌、目标益生菌按照分组接种于珊瑚上，通过观察珊瑚上虫黄藻数量变化、光合效率和珊瑚表观形态变化判断目标益生菌是否能对目标致病菌有防治作用及效果。本发明防治珊瑚致病菌的方法科学可靠，对保护珊瑚礁资源和提高珊瑚人工移植成活率有重大意义。

技术领域

本发明涉及珊瑚疾病防治技术领域，具体涉及一种珊瑚致病菌的益生菌筛选及防治方法。

背景技术

珊瑚礁生态系统是初级生产力最高的海洋生态系统之一，具有极高的生物多样性和重要的经济价值。然而，近几十年来，珊瑚礁逐渐退化。据Mulhall M等调查，1980年代初到2000年，珊瑚礁的总面积已从约60万平方公里，减少到约25万平方公里。导致珊瑚礁退化的因素很多，包括自然环境因素(气候变化、海洋酸化、厄尔尼诺、漂白、旋风)和人为因素(炸药捕鱼、过度使用生物资源、冲洗农田、化学污染)以及生物因素(海星摄食、大型藻类竞争、病原微生物)。其中，病原微生物是导致珊瑚退化重要原因之一。由于环境因素及人为因素的影响，珊瑚的免疫能力下降，从而进一步使珊瑚更易受到病原菌的感染及危害。迄今为止，已经发现的由病原微生物导致的珊瑚疾病已经波及106种珊瑚，范围遍及54个国家。

在2002年，Y.Ben-Haim等人从患病的鹿角杯形珊瑚中分离得到Vibriocoralliilyticus，并且通过科赫法则验证了Vibrio coralliilyticus为鹿角杯形珊瑚的病原菌。Vibrio coralliilyticus是一种温度依赖性的病原菌，在高于27℃时就可以导致鹿角杯形珊瑚的虫黄藻裂解和组织脱落，进而导致珊瑚白化。21世纪以来，Vibriocoralliilyticus引起珊瑚白化的事件频发，因此，探索Vibrio coralliilyticus引起鹿角杯形珊瑚白化的防治尤为重要。

现在主要对珊瑚疾病采用的防治方法主要包括：物理方法、抗生素疗法、益生菌疗法、噬菌体疗法这几种。其中，益生菌疗法为本发明主要探讨的方法，益生菌疗法在水生生物疾病防治中已得到多数学者证实并应用。朱正祥等发现在饲料中添加适宜浓度丁酸梭菌可以改善鲤机体免疫力，调节肠道菌群结构，并且抑制有害菌群增殖；谷舞等发现其获得的益生芽孢菌对对虾生长发育及抗病能力方面有益生作用，且提升凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染的能力。近两年，在珊瑚疾病防治中益生菌疗法也被证明有一定的效果，PhillipeM.Rosado等人发现使用益生菌团可以缓解Vibrio coralliilyticus导致的珊瑚白化。然而，对于Vibrio coralliilyticus导致的鹿角杯形珊瑚的白化尚未有较好的防治方法。因此，本发明提供对于目标致病菌一种防治方法具有重要的意义。

本发明涉及的目标致病菌株为Vibrio coralliilyticus，目标益生菌株为GXUZ9。本发明对目标益生菌菌株GXUZ9是否具有防治目标菌株引起的珊瑚疾病进行了鉴定，并以提前用目标益生菌处理珊瑚的思路来防治致病菌导致的疾病。

发明内容

本发明的目的在于针对现有鹿角杯形珊瑚致病菌的防治的不足，提供一种针对珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及利用益生菌防治致病菌导致的珊瑚疾病方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种珊瑚致病菌的潜在益生菌筛选及防治方法，其特征在于，所述筛选方法包括如下步骤：

(a1)样本选择：采集生长状态良好的健康珊瑚，置于养殖池中适应至少15d；

(a2)菌株培养：将待筛选菌株和目标致病菌菌株分别接种于液体培养基中，摇床培养，测定菌株的OD₆₀₀值并制作其生长曲线；