[发明专利]检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条及其制备方法

权利要求书

1.检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条在制备术中现场快速检测可疑淋巴结的甲状腺球蛋白值的工具中的应用，其特征在于，所述检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条，包括依次部分叠接在PVC底板上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，其特征在于：所述金标垫包被有胶体金标记的一种抗甲状腺球蛋白抗体，所述硝酸纤维素膜上设有分隔的检测线和质控线，检测线包被另一种抗甲状腺球蛋白抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条的制备方法，包括以下步骤：

Ⅰ.胶体金的制备：向沸腾的超纯水中加入1％氯金酸溶液，再加入1％柠檬酸三钠溶液，加热至溶液呈酒红色透亮，冷却，定容，即为胶体金溶液；

Ⅱ.胶体金标记甲状腺球蛋白抗体的制备及纯化：取步骤Ⅰ中制得的胶体金溶液，以0.1M K₂CO₃溶液调节pH值至8.5-9，加入抗甲状腺球蛋白抗体，静置后加入2％BSA溶液，静置，制得金标抗体溶液；

所述金标抗体溶液在3-5℃、1000-1500rpm、10-20min条件下离心，去沉淀；再在3-5℃、10000-12000rpm、30-40min的条件下离心，去上清；以pH910mM Tris液复溶，加入0.5％PEG20000；5-10min后在3-5℃、10000-12000rpm、30-40min条件下再次离心，去上清；以胶体金复溶液复溶；

Ⅲ.金标垫与样品垫预处理：金标垫以金标垫处理液浸泡，室温干燥；样品垫以样品垫处理液浸泡，室温干燥；

Ⅳ.试纸条的组装：

将包被有另一种抗甲状腺球蛋白抗体和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜和吸水垫次第粘贴在PVC底板上，二者部分重合，吸水垫在上；

将步骤Ⅱ中制得的金标抗体溶液涂布于步骤Ⅲ中预处理过的金标垫，室温干燥；将金标垫粘贴在PVC底板上，与硝酸纤维素膜的未重叠侧部分重叠，金标垫在上；

将步骤Ⅲ中预处理过的样品垫粘贴在PVC底板上，与金标垫的未重叠侧部分重叠，样品垫在上。

3.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述胶体金复溶液及金标垫预处理液为5％蔗糖、1％BSA、0.1％Tween20、0.01％NaN₃的PBS液，pH8.5；所述样品垫预处理液为0.1％Tween20、pH 8.5Tris-HCl液；所述T线划线稀释液、C线划线稀释液为0.01M pH 7.2PBS液。

4.根据权利要求2所述应用，其特征在于：所述硝酸纤维素膜上抗甲状腺球蛋白抗体浓度均为2-3mg/ml，羊抗鼠IgG抗体浓度均为3-5mg/ml。

5.根据权利要求2所述应用，其特征在于：将步骤Ⅳ制得的试纸板切成宽约3-4mm的试纸条。

6.根据权利要求2所述应用，其特征在于：步骤Ⅱ中抗甲状腺球蛋白抗体加入量为5μg。

7.根据权利要求2所述应用，其特征在于：步骤Ⅱ中0.1M K₂CO₃溶液调节pH值至9。

8.检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条在制备辅助诊断甲状腺乳头状癌的淋巴结转移的工具中的应用，其特征在于，所述检测甲状腺球蛋白的免疫胶体金试纸条，包括依次部分叠接在PVC底板上的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜、吸水垫，其特征在于：所述金标垫包被有胶体金标记的一种抗甲状腺球蛋白抗体，所述硝酸纤维素膜上设有分隔的检测线和质控线，检测线包被另一种抗甲状腺球蛋白抗体，质控线上包被羊抗鼠IgG。