[发明专利]一种富集多不饱和脂肪酸的脂肪酶固定化方法

说明书

本发明公开了一种富集多不饱和脂肪酸的脂肪酶固定化方法。本发明方法包括，将脂肪酶溶于缓冲液中得到脂肪酶液；取所述脂肪酶液与树脂于反应器中，反应后分离固液相，将固相干燥后即得到固定化脂肪酶。本发明采用大孔树脂固定游离的脂肪酶，脂肪酶固定化之后提高酶本身的在富集n‑3PUFA方面的活力，增强水解或醇解的效率，提升产物中n‑3PUFA含量，同时产物和酶易于分离，且可以回收利用，节约成本。

技术领域

本发明涉及油脂深加工领域，具体涉及一种富集多不饱和脂肪酸的脂肪酶固定化方法。

背景技术

脂肪酶是油脂工业中常用的生物催化剂，常用于催化油脂的水解和特殊脂质的合成。其来源广泛，常见于原核生物和真核生物中。近几年研究地较多的脂肪酶主要来源于细菌和酵母中，而与动植物脂肪酶相比，微生物脂肪酶具有诸多优点，如容易获得，产酶周期短，能够大规模生产，具有更广的pH适应性、温度耐受性等。

在油脂工业中，直接使用游离酶，反应后很难将脂肪酶分离出来再次利用，会直接影响后续的工序操作，也会造成脂肪酶的浪费，造成较高的成本。酶的固定化，将游离的脂肪酶固定在载体上。一方面易于酶促反应结束后油和酶的分离，分离后的固定化脂肪酶可重复使用。另一方面固定化酶比游离酶具有更高的酶活力和稳定性。

多不饱和脂肪酸(PUFA)具有抗炎、治疗冠心病和提升智力等多种生理功能。市面上的n-3 PUFAs产品主要有乙酯型、甘油酯型和游离脂肪酸型三种形式。但乙酯型在人体中消化和吸收较为困难，游离脂肪酸型稳定性差，甘油酯型是最佳的选择，而甘油酯型中n-3PUFAs的含量相对较低，在30％左右，不能满足人们的保健及药用需求，浓缩甘油酯型n-3PUFAs非常有必要。

因此，开发一种绿色高效，且可以缩减成本的酶法富集n-3 PUFAs的方法具有重要研究意义和价值。

发明内容

本发明针对现有技术存在的不足，提供了一种富集多不饱和脂肪酸的脂肪酶固定化方法，具体是利用脂肪酶液体和树脂混合固化反应，使脂肪酶固定化。通过本发明的方法，能够将脂肪酶的重复使用次数提高到5次以上，且相比较游离酶具有更高的催化效率。对于酶法富集油脂中n-3多不饱和脂肪酸甘油酯的工业化提供了重要技术支撑。

作为本发明的一个方面，提供了一种富集多不饱和脂肪酸的脂肪酶固定化方法，所述方法包括，将脂肪酶溶于缓冲液中得到脂肪酶液；取所述脂肪酶液与树脂于反应器中，反应后分离固液相，将固相干燥后即得到固定化脂肪酶；

其中，所述脂肪酶包括来源于圆筒状假丝酵母Candida cylindracea的AYAmano400SD、AYAmano30SD和来源于南极假丝酵母Candida antarctica的Candida antarcticalipase A中的一种或多种。

进一步地，所述树脂为苯乙烯系大孔吸附树脂，包括NKA-9、AB-8和D101中的一种或多种。

进一步地，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、柠檬酸盐缓冲液中的一种或者多种。

进一步地，所述脂肪酶液的pH为5～7；脂肪酶液中脂肪酶浓度为5～30mg/mL。

进一步地，所述脂肪酶液和树脂的质量比为2:1～150:1。

进一步地，所述反应的温度为20～50℃。

进一步地，所述反应的时间为3～12h。

进一步地，所述反应器包括恒温搅拌器或恒温振荡器；其中，搅拌或震荡速率为60～300r/min。

作为本发明的第二个方面，提供一种固定化脂肪酶，由上述任一富集多不饱和脂肪酸的脂肪酶固定化方法制得的。