[发明专利]一种CIK细胞库的构建方法

说明书

本发明公开了CIK细胞库的构建方法，步骤依次包括：采集人外周血，分离自体血浆，分离外周血单个核细胞，扩增培养CIK细胞，CIK细胞检测，CIK细胞冻存，编码入库并上传细胞信息档案。本发明属于细胞库构建技术领域，具体是指一种基于CIK细胞库的构建方法。

技术领域

本发明属于细胞库构建技术领域，具体是指一种基于CIK细胞库的构建方法。

背景技术

19世纪80年代兴起的细胞过继免疫治疗带给了肿瘤患者新的希望。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)是一群由多种细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-1等)、抗CD3抗体联合诱导的以CD3+和CD56+T细胞为主的异质细胞，通过细胞毒T细胞(cytotoxiclymphocyte，CTL)溶胞效应和细胞凋亡途径发挥抗肿瘤作用，并能消除术后微小残留病灶，防止癌细胞扩散与肿瘤复发，是一种新型的过继免疫疗法中的主要功能细胞。生理状态下，表达CD3+和CD56+T淋巴细胞在正常人体外周血中占(1-5)％，远不能满足临床治疗的需要。随着体外扩增技术的日趋完善，为临床提供足量的CD3+和CD56+效应T 细胞成为现实。然而，随着年龄的增长人体内的CIK细胞活性会逐渐下降，待有需要时难以满足使用需求，趁着年轻将细胞储存下来成为一种新的选择。为了便于人们有效储存和使用有效的组织和细胞资源，目前在世界范围内已经有多种细胞库或者组织库建立，如脐血造血干细胞库，间充质干细胞库等。所谓的细胞库是指大规模生产制备与长期在约为-196℃液氮中贮存可溯源的细胞及搜集相关资料的场所。

发明内容

为了解决上述难题，本发明提供了一种基于CIK细胞库的构建方法。

为了实现上述功能，本发明采取的技术方案如下：一种基于CIK细胞库的构建方法，包括如下步骤：

1)采集人外周血；

2)分离自体血浆；

3)分离外周血单个核细胞；

4)扩增培养CIK细胞；

5)CIK细胞检测；

6)CIK细胞冻存；

7)编码入库并上传细胞信息档案。

作为优选，用于提供所述人外周血的供者为在人外周血采集前符合献血标准的供者。

作为优选，所述步骤1)中的采集人外周血是将人外周血采集至含枸橼酸钠抗凝剂的采血袋中。

进一步地，所述步骤2)中的分离自体血浆的方法，包括如下步骤：

1)将采血袋中含枸橼酸钠抗凝剂的人外周血转移至50ml离心管，利用离心机进行离心；

2)离心条件：4℃，1000-2800rpm离心5-20min，离心机调节升速1- 9，降速1-9；

3)取上层淡黄色液体至新的50ml离心管，置于56℃水浴锅中灭活30 min后，3000-3500rpm离心3-8min收集上清得到自体血浆，置于-20℃冻存备用。

进一步地，所述步骤3)中的分离外周血单个核细胞的方法，包括如下步骤：

1)将去除自体血浆后的下层红色液体按照体积量计用生理盐水对倍稀释吹打混匀；

2)加入其0-2倍体积的0wt％-6wt％的羟乙基淀粉溶液，混匀后静置0-40min，缓慢地将20-25ml红色液体和/或上清液加入到含20ml 淋巴细胞分离液的离心管中，使其与淋巴细胞分离液形成一个明显的分层；

3)利用离心机进行离心分离，离心条件：4℃，1800-5000rpm离心10- 30min，离心机调节升速1-3，降速1-3；