[发明专利]苦参组分的HPLC检测方法

说明书

本发明属于中医中药技术领域，具体涉及一种中药苦参组分的HPLC检测方法，包括(1)色谱条件与系统适用性试验(2)溶液制备(3)测定等步骤。本发明苦参组分的HPLC检测方法，该方法操作简单，检测效率高，误差小，重现性好，专属性强，检验方法较稳定，受影响的因素较少，适用性广；该方法的专属性、稳定性、精密度、准确度等均符合方法学验证要求，具有很强实用性，采用该方法对多家企业生产的苦参(中药饮片)组分进行检测，能够快速准确的检测出氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱、槐果碱的含量，可用于苦参中药材及其饮片的检验分析和品质判定。

技术领域

本发明属于中医中药技术领域，具体涉及一种中药苦参组分的HPLC检测方法。

背景技术

苦参为常用中药材，是豆科植物苦参(Sophora flavescens Ait.)的干燥根，具有清热燥湿、杀虫、利尿的功效。临床用于热痢、便血、黄疸、尿闭、赤白带下、阴肿阴痒、湿疹、皮肤瘙痒、疥癣麻风，外治滴虫性阴道炎。由于其治疗效果显著，目前在临床上已被广泛使用，其主要有效成分包括氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱等多种生物碱。

氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱是苦参的主要有效成分，苦参的现行标准中，《中国药典》2020年版一部，不控制氧化槐果碱、槐定碱和槐果碱的含量，仅以氧化苦参碱和含量较小的苦参碱为质控指标，不尽合理。

本发明的目的是针对现有技术存在的不足而提供的一种苦参组分的HPLC检测方法，采用该方法对苦参中的多种生物碱组分进行测定，操作简单，检测效率高，误差小，重现性好，专属性强，检验方法较稳定，适用性广，能有效的控制苦参的质量。

发明内容

为实现上述目的，本发明采用如下的技术方案：

一种苦参组分的HPLC检测方法，包括以下步骤：

(1)色谱条件与系统适用性试验：

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，色谱柱：WatersT3 C18柱，4.6×250mm，5μm或等效柱，流动相：乙腈(A)-0.1％磷酸溶液(三乙胺调pH值至8.0)(B)，梯度洗脱(程序见表1)。流速：1.0ml/min，检测波长：208nm，柱温：25℃，进样量：20μl，理论板数按槐定碱峰计算应不低于5000。

表1 梯度洗脱程序

(2)溶液制备：

供试品溶液制备：取本品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液0.5ml湿润，精密加入三氯甲烷25ml，密塞，称定重量，超声处理(功率320W，频率40kHz)45分钟，放冷，再称定重量，用三氯甲烷补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，回收溶剂至干，残渣加乙腈-0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(11∶89)适量使溶解，转移至10ml量瓶中，加乙腈-0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(11∶89)至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，5000转/min离心5min后用0.45μm的滤膜过滤，即得供试品溶液。

对照品溶液的制备：精密称取氧化苦参碱对照品、氧化槐果碱对照品、槐定碱对照品、苦参碱对照品和槐果碱对照品适量，用乙腈-0.1％磷酸溶液(三乙胺调节pH值至8.0)(11∶89)定量稀释制成每1ml含氧化苦参碱150μg、氧化槐果碱100μg、槐定碱75μg、苦参碱10μg、槐果碱10μg的混合溶液，即得。

(3)测定：

分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定，记录色谱图。供试品溶液中各组分的含量用对照品溶液以外标法计算。

上述的苦参组分的HPLC检测方法，所述的检测器为紫外-可见分光检测器。

所述的苦参组分的HPLC检测方法，用HPLC法检测苦参组分，将氧化苦参碱、氧化槐果碱、槐定碱、苦参碱和槐果碱分离，可单独测定这五个组分的含量。