[发明专利]用于检测玉米内州萎蔫病菌的特异性引物和探针及实时荧光定量PCR检测试剂盒在审
| 申请号： | 202110371863.X | 申请日： | 2021-04-07 |
| 公开（公告）号： | CN113528679A | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | 车妍;李潇玲;辛倩;李春;杜弢;徐全乐;沈颂东;杨立坤;车团结 | 申请（专利权）人： | 兰州百源基因技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京兴智翔达知识产权代理有限公司 11768 | 代理人： | 郭卫芹 |
| 地址： | 730000 甘肃省兰州市*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 检测 玉米 萎蔫 病菌 特异性 引物 探针 实时 荧光 定量 pcr 试剂盒 | ||
1.用于检测玉米内州萎蔫病菌的特异性引物和探针，其特征在于：
所述特异性引物为下述序列或为下述序列的互补链序列：
上游引物序列为5'-CAGGGAGATCACGGTGCCAA-3'；
下游引物序列为5'-AGGACCCAACAGCGTGCAA-3'
所述探针序列为：5'-ACACACCAGACCGCGTTCCCA-3'。
2.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于：所述探针中5’端标记的荧光报告基团为FAM；3’端标记的荧光淬灭基团为TAMRA。
3.根据权利要求1所述的特异性引物和探针，其特征在于：所述上游引物和所述下游引物为向5’端和3’端方向延伸一至数个碱基或删减一至数个碱基得到的序列。
4.一种用于检测玉米内州萎蔫病菌的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCR试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的特异性引物和探针。
5.根据权利要求4所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：在25ul PCR反应体系中，所述上游引物的用量为0.4ul，所述下游引物的用量为0.4ul，所述探针的用量为0.2ul。
6.根据权利要求4或5所述的实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于：所述实时荧光定量PCR试剂盒还包括系列浓度标准品，所述标准品的核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO.2。
7.权利要求1-3任一所述的特异性引物和探针、权利要求4-6任一所述的实时荧光定量PCR试剂盒在如下任一中的应用：
(1)定性检测或辅助检测玉米内州萎蔫病菌；
(2)制备定性检测或辅助检测玉米内州萎蔫病菌的产品。
8.一种定性检测玉米内州萎蔫病菌的方法，其特征在于：分别以阳性质粒标准品和待测样品DNA为模板，以ddH2O为空白对照，利用权利要求1中所述的特异性引物和探针进行实时荧光定量PCR，根据荧光曲线判断样品是否为阳性，具体为：Ct值≤35时，为阳性，反之，则为阴性。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述实时荧光定量PCR的反应条件为：
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