[发明专利]何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法

权利要求书

1.一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）制备杨梅苷、槲皮苷和山柰酚-3-O-鼠李糖苷的标准品，吸取不同浓度的混合标准品采用高效液相色谱仪进行分析，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标分别绘制杨梅苷、槲皮苷、山柰酚-3-O-鼠李糖苷的标准曲线并确定杨梅苷、槲皮苷、山柰酚-3-O-鼠李糖苷的线性回归方程；所确定的杨梅苷、槲皮苷、山柰酚-3-O-鼠李糖苷的线性回归方程分别如下：

杨梅苷：Y₁=4201.6X₁-80.608, R²=0.9981；

槲皮苷：Y₂=15561X₂-98.699, R²=0.9991；

山柰酚-3-O-鼠李糖苷：Y₃=18931X₃-61.969, R²=1；

(2) 将何首乌叶烘干，粉碎过筛后加入浓度为70%-95%甲醇水溶液进行超声提取得到待检测的样品溶液；将待检测的何首乌叶样品溶液采用高效液相色谱仪进行分析，将样品进行梯度洗脱，分别测定洗脱物三个优势峰的峰面积；超声提取的条件为：温度为30-50℃、超声时间为25-60 min、超声频率为30-50kHz；

(3)对照步骤（1）的标准曲线和线性回归方程计算待检测何首乌叶样品中杨梅苷、槲皮苷和山柰酚-3-O-鼠李糖苷的含量；

步骤（1）或（3）中采用高效液相色谱仪进行分析的色谱条件为：流动相A为100%乙腈溶液，流动相B为超纯水；所述的色谱条件中固定相是以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；流速0.5-1.5mL/min；检测波长：200-280nm；进样量：5-20μL；柱温：30-40℃；

梯度洗脱程序如下：

时间：0~10 min，流动相A：15，流动相B：85；时间：10~13min，流动相A：25，流动相B：75；时间：13~35min，流动相A：25，流动相B：75。