[发明专利]何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法

说明书

本发明公开了一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，包括：(1)制备杨梅苷、槲皮苷和山柰酚‑3‑O‑鼠李糖苷的标准品分别绘制杨梅苷、槲皮苷和山柰酚‑3‑O‑鼠李糖苷的标准曲线并确定其线性回归方程；(2)将待检测的何首乌叶样品溶液采用高效液相色谱仪进行分析，将样品进行梯度洗脱，分别测定洗脱物三个优势峰的峰面积；(3)对照标准曲线和线性回归方程计算待检测何首乌叶样品中杨梅苷、槲皮苷和山柰酚‑3‑O‑鼠李糖苷的含量。本发明所建立的何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法选择性好、灵敏度高、准确可靠，为何首乌叶制品的品质分析和质量控制提供了新的分析方法及依据。

技术领域

本发明涉及何首乌叶中黄酮类化合物含量的检测方法，尤其涉及何首乌叶中黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，属于何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的检测领域。

背景技术

何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)，又名夜交藤，首乌藤，为蓼科(Polygonaceae)何首乌属(Fallopia Adans.)多年生草本植物何首乌的干燥块茎。在《本草纲目》、《中国药典》上均有收录记载，《本草纲目》曰“性甘、平；归心、肝经。具有养血安神、祛风通络的功效。用于失眠多梦、血虚身痛、风湿痹痛、皮肤瘙痒等症。”何首乌中含有多种生物活性类物质，其中最主要的包括黄酮类化合物、二苯乙烯苷类化合物、蒽醌类化合物、多酚类化合物和磷脂类及脂肪酸类等活性成分。现代药理研究表明何首乌具有镇静安神、抗慢性炎症及抗菌等作用。

随着国民生活水平的提高，当今人们对健康愈发重视。何首乌作为我国传统的补益中药，其性状评价和品质鉴定的内容和领域需有所拓宽。目前何首乌块根的化学成分及含量测定已有大量学者进行了研究，而何首乌的其余部分如何首乌叶中的化学成分及其含量，仍存在着研究不够深入、评价标准模糊、体系不够完善、分析方法难以统一等问题，造成整个行业总体缺乏标准的鉴定体系，发展步伐缓慢。黄酮类化合物作为何首乌中的重要活性物质之一，也是广受人们关注的天然自由基清除剂，具有抗氧化、抗衰老、抗三高的作用。何首乌叶中黄酮类化合物的含量测定研究，对于提高何首乌资源的整体利用率，提升何首乌的整体价值有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC(高效液相色谱)检测方法。

本发明的目的通过下述技术方案来实现，

一种何首乌叶中主要黄酮类化合物含量的HPLC检测方法，包括：

(1)制备杨梅苷、槲皮苷、山柰酚-3-O-鼠李糖苷的标准品，吸取不同浓度的标准品采用高效液相色谱仪进行分析，以进样浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标分别绘制标准曲线，确定杨梅苷、槲皮苷、山柰酚-3-O-鼠李糖苷的线性回归方程；

(2)将待检测的何首乌叶样品溶液采用高效液相色谱仪进行分析，将样品进行梯度洗脱，测定洗脱物的优势峰的峰面积；

(3)通过步骤(1)的线性回归方程计算待检测何首乌叶样品中杨梅苷、槲皮苷和山柰酚-3-O-鼠李糖苷的含量。

具体地，步骤(1)中所确定的线性回归方程如下：

杨梅苷：Y₁＝4201.6X₁-80.608,R²＝0.9981；

槲皮苷：Y₂＝15561X₂-98.699,R²＝0.9991；

山柰酚-3-O-鼠李糖苷：Y₃＝18931X₃-61.969,R²＝1。

具体地，步骤(2)中所述的何首乌叶样品溶液的制备包括：将何首乌叶烘干，粉碎过筛后加入甲醇水溶液进行超声提取得到待检测的样品溶液。