[发明专利]一种眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法

权利要求书

1.一种眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，包括：

将眼镜蛇粗毒进行两次凝胶层析，其中凝胶层析Ⅰ为SP-Sephadex G-25柱层析，凝胶层析Ⅱ为Acta Rosorse柱层析或Hplc Resours柱层析；在凝胶层析Ⅰ之前对加入缓冲液的蛇毒和凝胶层析Ⅰ后对于粗蛇毒神经生长因子液进行冷冻处理。

2.如权利要求1所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于所述冷冻处理可以是选自常规冷冻、CAS冷冻、高压冷冻、磁共振冷冻技术、微波辐射冷冻、超声波冷冻、真空冷冻中的一种；优选的，所述冷冻处理选自CAS冷冻、真空冷冻、超声冷冻和微博辐射冷冻，更为优选的所属冷冻处理选自CAS冷冻、真空冷冻、超声冷冻。

3.如权利要求2所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于所述凝胶层析在低于25℃下进行，更优选的低于20℃，更加优选的低于10℃。

4.如权利要求2所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于所述凝胶层析过程中缓冲液的pH值优选在5-8之间。

5.如权利要求2所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于所述凝胶层析中的缓冲液可选自醋酸缓冲液，磷酸缓冲液，Tris缓冲液、MES缓冲液、Bis-Tris缓冲液、HEPES缓冲液、PIPES缓冲液、MOPS缓冲液、Tricine缓冲液、TEA缓冲液等中的一种。

6.如权利要求2所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于所述凝胶层析的洗脱液采用Nacl溶液进行洗脱，梯度为0-1M，流速为20-60m/h。

7.如权利要求2所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于凝胶层析Ⅰ柱层析的柱比为5-25。

8.如权利要求2所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于凝胶层析Ⅱ的柱比为20-45。

9.如权利要求1所述的眼镜蛇毒注射用NGF的制备方法，其特征在于还包括预处理环节，所述预处理为将冻干蛇毒加入缓冲液中溶解制成0.1-1g/ml的蛇毒冻干粉溶液。