[发明专利]一种检测滤棒抑菌效果的方法

说明书

本发明涉及一种检测滤棒抑菌效果的方法，包括如下步骤：活化测试菌株并制备菌悬液，制备测试及对照滤棒样品，加样并接触作用，洗脱菌并检测存活菌数，计算抑菌率。本技术方案的检测滤棒抑菌效果的方法可以快捷地检测滤棒的抑菌效果，操作简便，利于推广应用。

技术领域

本发明涉及抑菌效果评价领域，更具体地，涉及一种检测滤棒抑菌效果的方法。

背景技术

滤棒是采用丝束、滤棒成型纸等加工卷制而成，能够起到过滤卷烟烟气的作用。卷烟作为一种吸食用产品，其滤嘴端与消费者口腔直接接触，具有抑菌功能的卷烟滤嘴或滤棒的研发及应用受到广泛关注。例如，黄晓伟等公开了一种含有抑菌活性多糖的抗菌卷烟过滤嘴及其制备方法(CN201510222452.9)；孙绍彬等公开一种含有抗氧化抑菌剂的天然生物基质滤棒颗粒及其制法和用途(CN201911165344.7)；胡光敏等公开了一种具有广谱抗菌性能的壳聚糖纤维在制备香烟过滤嘴中的应用(CN201010612530.3)；李炜等公开了一种选择性降低卷烟烟气中氨兼具抑菌作用的滤嘴(CN202011040864.8)；齐富友等公开了一种含有天然中草药抗菌剂的卷烟过滤嘴的制备方法(CN201310279387.4)。具有抑菌功能的滤棒或滤嘴已被应用，但是关于该类材料的抑菌效果的检测方法未见公开报道。因此，如何提供一种适用于滤棒的抑菌效果的检测方法成为本领域亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测滤棒抑菌效果的方法，以解决现技术没有合适的抑菌效果检测方法的问题。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种检测滤棒抑菌效果的方法，包括如下步骤：

步骤1)菌株活化：

制备培养基斜面，将测试菌株接种至培养基斜面上，置于36℃恒温培养箱中培养20-24h；重复步骤1)，至菌株活化至第3代；

步骤2)菌悬液制备：

取第3代培养基斜面的新鲜培养物，吸取0.03mol/L，pH 7.2的无菌磷酸缓冲液3.0mL加入斜面试管内，反复吹吸后将洗脱液移至无菌离心管中，涡旋混匀；再用无菌磷酸缓冲液稀释成1.0×10⁵-5.0×10⁵CFU/mL的菌悬液；

步骤3)样品制备：

采用无菌操作，选取由待测滤棒和对照滤棒制成的样片；其中，以未添加抑菌成分的同材质滤棒作为对照滤棒；

步骤4)加样及作用：

用无菌镊子各取2片待测滤棒的样片和对照滤棒的样片，分别置于无菌培养皿内，每个样片滴加0.1mL步骤1)的菌悬液，置于20℃恒温培养箱内，接触作用20-24h；

步骤5)菌落计数：

作用结束后，夹取染菌样片分别置于含5.0mL无菌磷酸缓冲液的无菌离心管中，振荡混匀后，收集洗脱液；用无菌磷酸缓冲液将洗脱液，制备成10倍系列稀释匀液；取10^-2、10^-3、10^-4三个稀释度的样品匀液，每个稀释度各取1mL加入无菌培养皿中，每管洗脱液接种2个培养皿，再加入经过121℃高压灭菌15min后冷却至45℃的相应的琼脂培养基，混匀后置于36℃恒温培养箱中培养48h；计数存活菌落数。

步骤6)抑菌率计算：

按照公式①计算抑菌率：

式中：X为抑菌率，％；

C₀为对照样品组的平均菌落数，单位为CFU/片；

C₁—测试样品组的平均菌落数，单位为CFU/片。