[发明专利]一种多价疫苗中B型流感嗜血杆菌多糖含量的测定方法

权利要求书

1.一种多价疫苗中B型流感嗜血杆菌多糖含量的测定方法，所述的多价疫苗为无细胞百白破疫苗-脊髓灰质炎灭活疫苗-B型流感嗜血杆菌结合疫苗五联型疫苗(DTacP-sIPV-Hib联合疫苗)，所述的测定方法包括如下步骤：

(1)样品预处理，包括如下步骤：

去佐剂：DTacP-sIPV-Hib联合疫苗置于离心机内，离心去除佐剂，取上清液样品；

去保护剂：上清液样品于10kDa超滤离心管内离心后弃滤过液后补加去离子水，去除保护剂得待水解样品；

水解：待水解样品，加入盐酸，振荡混匀，于100℃条件下水浴2小时得水解液；水解完成后，待样品冷却至室温；于水解液中加入NaOH，混匀，使用0.22μm针头滤器对水解液进行过滤，得到供试样品；

(2)色谱检测：包括以下步骤：

检测参数如下：柱温：35℃；进样体积：25μL；信号收集速率：1Hz；

洗脱液为浓度300～400mmol/L的NaOH溶液，洗脱液流速为0.3ml/min；

使用标准曲线法计算出B型流感嗜血杆菌多糖含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，

步骤(1)所述的样品预处理步骤中，

去佐剂步骤中，DTacP-sIPV-Hib联合疫苗取样量为5-10ml；离心参数为：4℃，6500rpm，离心15min。

3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，

步骤(1)所述的样品预处理步骤中，

去保护剂步骤中，上清液取样量为5-8ml；离心参数为：4℃，6500rpm离心30min；离心后补加等体积的去离子水；且离心与补水溶解的步骤重复三次。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，

步骤(1)所述的样品预处理步骤中，

水解步骤中，加入盐酸至终浓度0.28M；加入NaOH至终浓度至0.34M。

5.根据权利要求1-4任一所述的测定方法，其特征在于，

步骤(2)所述的色谱检测步骤中，

洗脱液为浓度350mM的NaOH溶液。

6.根据权利要求5所述的测定方法，其特征在于，

步骤(2)所述的色谱检测步骤中，

使用标准曲线法计算出B型流感嗜血杆菌多糖含量的方法为：使用标准曲线法，根据峰面积计算核糖醇含量，按照核糖醇占B型流感嗜血杆菌多糖干重质量分数(41.3％)计算出B型流感嗜血杆菌多糖含量；

优选的，根据峰面积计算核糖醇含量的公式为：y＝6.8785x+0.0006，式中，x为核糖醇含量，单位为μg/ml；y为目标峰峰面积，单位为nC*min。

7.权利要求1-6任一所述的多价疫苗中B型流感嗜血杆菌多糖含量的测定方法在检测分析多价疫苗质量中的应用，所述的多价疫苗为无细胞百白破疫苗-脊髓灰质炎灭活疫苗-B型流感嗜血杆菌结合疫苗五联型疫苗(DTacP-sIPV-Hib联合疫苗)。