[发明专利]一种硫酸软骨素超滤废液制备胶原蛋白肽的方法

权利要求书

1.一种硫酸软骨素联产高纯度胶原蛋白肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）原料中加入蛋白酶在水中进行酶解，调节pH，加热灭活酶，过滤得酶解液I；

（2）酶解液I过截留分子量为10kDa的膜进行超滤，获得浓缩液I和流出液I；

（3）浓缩液I分离纯化后制备硫酸软骨素；流出液I经纳滤膜浓缩，获得浓缩液II和流出液II；

（4）浓缩液II调节pH，以强阴离子树脂吸附；

（5）树脂滤除后调pH值，升温后添加蛋白酶酶解，加热灭活酶，过滤得酶解液II；

（6）酶解液II调节pH后添加活性炭吸附，然后过滤，获得滤液；

（7）将滤液灭菌、过滤、干燥获得胶原蛋白肽；

步骤（1）中，所述蛋白酶为诺维信Alcalase 3.0T；蛋白酶加入量为软骨质量的0.5-1.5%；

步骤（1）中，酶解温度为45-50℃，酶解时间为2-4h，酶解pH为8-9；

步骤（2）中，超滤终点为流出液I的OD₂₈₀不大于0.6；超滤维持体积为酶解液I体积的1/4-1/6；

步骤（3）中，所述纳滤膜的截留分子量为200-500道尔顿；所述纳滤条件为：压力4.2-5.5bar，溶液温度50-60℃；流出液II的电导率为5-12ms/cm；

步骤（4）中，pH为6.8-7.2；所述强阴离子树脂与浓缩液II的体积比为2-5:100；所述强阴离子树脂选自FPA98树脂、D201树脂或D202树脂；

步骤（5）中，所述蛋白酶为诺维信液体蛋白酶Esperase和胰蛋白酶的混合；诺维信液体蛋白酶Esperase添加量为蛋白质重量的0.1-0.3%，胰蛋白酶添加量为蛋白质重量的0.2-0.5%；

步骤（5）中，pH为8-9；所述酶解温度为45-50℃；

步骤（5）中，升温前还包括添加蛋白酶激活剂的步骤；所述蛋白酶激活剂选自可溶性钙盐、可溶性锌盐或可溶性镁盐中的至少一种；所述可溶性钙盐的添加量为蛋白酶质量的10-20%，所述可溶性锌盐或可溶性镁盐的添加量为蛋白酶质量的20-30%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，原料与水的质量体积比为1:5-10；

步骤（1）和（5）中，pH为4.2-5.0，蛋白酶灭活的温度为75-85℃。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）前，还包括原料热处理步骤：将软骨在水中90-100℃加热2-4h。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（6）中，所述pH为5.0-6.0；所述活性炭与浓缩液II的质量体积比为1-2%；所述吸附时间为1.5-2h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（7）中，所述灭菌为高压蒸汽灭菌；温度为110-130℃，压力为0.1-0.3Mpa，时间为10-20min；所述干燥选自喷雾干燥或冻干。