[发明专利]RNA修饰嵌合蛋白及其应用

权利要求书

1.一种嵌合蛋白亚基，包含融合的(a)RNA加帽酶的D12亚基或其功能片段，或与之具有至少90％序列相同性并具有D12亚基活性的变体，和(b)RNA帽结构2′-O-甲基转移酶或其功能片段，或与之具有至少90％序列相同性并具有RNA帽结构2′-O-甲基转移活性的变体，以及任选的(c)(a)和(b)之间的接头，

优选地，

所述RNA加帽酶是牛痘病毒RNA加帽酶，

所述RNA帽结构2′-O-甲基转移酶是牛痘病毒2′-O-甲基转移酶，

(a)的羧基端与(b)的氨基端连接。

2.如权利要求1所述的嵌合蛋白亚基，其特征在于，

RNA加帽酶的D12亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第1-287所示，和/或

RNA帽结构2′-O-甲基转移酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第303-635所示，和/或

RNA加帽酶的D12亚基或其功能片段的变体具有选自以下一个或多个的突变：N42A、Y43A、L61A、K62A、F245A、L246A、K111A、R112A、N120A、N121A、N126A、N127A、F141A、R142A、K223A、D224A、H260A、S261A、E275A、N276A、R280A、R281A，和/或

RNA帽结构2′-O-甲基转移酶或其功能片段的变体具有如下特征：(1)具有选自以下一个或多个的突变：K41D、C178S、A201R、A201K、C272S；和/或(2)其中的一个或多个选自R、K、H、Y、C、D或E的氨基酸突变为A，和/或

(b)还具有位于其N端或C端的His标签和/或MBP标签，

接头的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第288-302位氨基酸所示，

优选地，嵌合蛋白亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

3.一种嵌合蛋白，包含：(1)权利要求1或2所述的嵌合蛋白亚基，和(2)RNA加帽酶D1亚基或其功能片段、或与之具有至少90％序列相同性并具有相应活性的变体，

优选地，

所述嵌合蛋白是异二聚体蛋白，和/或

所述RNA加帽酶是牛痘病毒RNA加帽酶，和/或

RNA加帽酶D1亚基的功能片段包含：

(1)N7甲基转移酶结构域或其功能片段；

(2)N7甲基转移酶结构域或其功能片段和5'-三磷酸酶结构域或其功能片段；

(3)N7甲基转移酶结构域或其功能片段和鸟苷转移酶结构域或其功能片段；或

(4)N7甲基转移酶结构域或其功能片段、5'-三磷酸酶结构域或其功能片段和鸟苷转移酶结构域或其功能片段。

4.如权利要求3所述的嵌合蛋白，其特征在于，

5'-三磷酸酶结构域如SEQ ID NO:3第1-225位氨基酸所示，和/或

鸟苷转移酶结构域如SEQ ID NO:3第226-530位氨基酸所示，和/或

N7甲基转移酶结构域如SEQ ID NO:3第531-844位氨基酸所示，和/或

RNA加帽酶D1亚基如SEQ ID NO:3所示，和/或

RNA加帽酶D1亚基的功能片段包含SEQ ID NO:3的第498-844位氨基酸或第540-844位氨基酸，和/或

N7-甲基转移酶结构域或其功能片段的变体具有选自以下一个或多个的突变：D545A、R548A、N550D、Y555F、R560K、R794A、R808A、Y683S、Y684A、Y684F、D598A、G600A、G602A，I681A、S684A、F685A、T571A、L575A、L576A、M579A、F585A、L586A、D587A,、D784A、N785A、R794A、F798A、M805A、E806A。