[发明专利]一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法

说明书

本发明属于冻干技术领域，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法。所述冻干方法包括以下步骤：取缓冲液将NSE溶解，制成NSE试剂，放入真空冷冻干燥机内进行冻干；其中，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷、KCl、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、BSA。该冻干方法能有效保存神经元特异性烯醇化酶，有利于保持其最大的活性。

技术领域

本发明属于冻干技术领域，具体涉及一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法。

背景技术

神经元特异性烯醇化酶(Neuron-Specific Enolase，NSE)是一种分子量约78000的酸性 蛋白酶。NSE是小细胞肺癌的重要标志物之一，可用于鉴别诊断，以及检测小细胞肺癌放疗、 化疗后的治疗效果。NSE还可用于神经母细胞瘤和肾母细胞瘤的鉴别诊断，对神经母细胞瘤 的早期诊断亦有较高的临床应用价值。

NSE是一种不稳定的生物活性物质，在常温和2-8℃环境中会迅速丧失活性。当NSE作 为试剂盒组分使用时，如果不进行冻干处理，会造成检测错误并导致试剂盒失效。使用特殊 的缓冲体系溶解NSE并将其冻干为干粉，可以长时间保持其活性，保证试剂盒的稳定性和有 效性。

使用一般缓冲液溶解NSE，在常温(10-30℃)环境下可以保持活性3天、在2-8℃条件 下可保持活性3个月、在-20℃条件下可保持活性9个月。保存时间较短，不利于试剂盒产品 的生产、储存及应用。

中国专利申请CN 106568976 A公开了一种神经元特异性烯醇化酶稳定剂及其制备方法， 涉及神经元特异性烯醇化酶稳定剂，通过如下原料制备而成：Tris·HCl缓冲液、NaCl、蔗糖、 海藻糖、酪蛋白、牛血清白蛋白、PEG6000、赖氨酸、乙二胺四乙酸二钠、二硫苏糖醇、甘 油、Tween-20、TritonX-100、终浓度抑肽酶、Proclin300，Millipore超纯水作为溶剂，溶液混 匀后用0.22μm滤膜过滤，0～10℃保存。能提高神经元特异性烯醇化酶的保存稳定性，延长 试剂盒的货架寿命；简化神经元特异性烯醇化酶检测试剂盒的生产工艺及医生检测操作过程； 提高了神经元特异性烯醇化酶配制、运输和储存过程中抗质变的能力；降低了由冻干工艺造 成的批间差。但是该稳定剂中的有效成分种类较多成本较高，另外，该发明中使用的成分复 杂，不同成分之间的相互作用反而不利于稳定剂提高NSE保存的稳定性。

本发明的目的是为了使神经元特异性烯醇化酶保持最大的活性，而提供的一种有效的冻 干品制备方法。

发明内容

为克服以上技术问题，本发明提供了一种神经元特异性烯醇化酶(NSE)的冻干方法， 该冻干方法能有效保存神经元特异性烯醇化酶，有利于保持其最大的活性。

为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：

一种神经元特异性烯醇化酶的冻干方法，包括以下步骤：取缓冲液将NSE溶解，制成 NSE试剂，放入真空冷冻干燥机内进行冻干；其中，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨 基甲烷(Tris)、氯化钾(KCl)、十二水磷酸氢二钠、硫酸镁、海藻糖、牛血清白蛋白(BSA)。

优选地，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4-20份、KCl 6-25份、十二水磷酸氢二钠1-6份、硫酸镁0.1-10份、海藻糖5.0-50份、BSA 1.0-50份。

优选地，按照重量份数计，所述缓冲液包括如下组分：三羟甲基氨基甲烷4.2-15.6份、 KCl 8.5-24份、十二水磷酸氢二钠1.2-5.8份、硫酸镁0.1-10份、海藻糖5.0-50份、BSA1.0-50 份；

优选地，所述缓冲液的制备方法，包括以下步骤：

(1)称取Tris、KCl、十二水磷酸氢二钠、MgSO₄、海藻糖、牛血清白蛋白，加入到纯化水中搅拌至完全溶解，调节pH值，定容；