[发明专利]一种底物浓度控制型时间分辨均相化学发光生物检测方法

权利要求书

1.一种均相化学发光生物检测方法，其特征在于，该方法是基于底物浓度控制的时间分辨均相化学发光生物检测方法，包括以下步骤：

(1)将催化剂和发光底物分别标记在生物识别分子上；

(2)将催化剂标记的生物识别分子、发光底物标记的生物识别分子、待测物进行生物识别反应并生成复合物；

(3)向反应体系中加入触发剂，标记在生物识别分子上的催化剂催化触发剂生成氧化性产物，氧化性产物与标记在生物识别分子上的发光底物反应并产生化学发光信号，由于复合物中发光底物周围微环境中的催化剂浓度较高，因此氧化性产物会迅速与复合物中的发光底物反应并将其完全消耗，此时产生一个特异性的闪光信号，而反应体系中游离的发光底物周围微环境中的催化剂浓度较低，因此发光反应速率较慢，产生一个滞后的非特异性信号，通过读取特异性闪光信号强度从而对待测物进行定量分析，

所述催化剂包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶；

所述发光底物包括吖啶酯、鲁米诺(luminol)、3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷二钠盐(AMPPD)；

所述触发剂为催化剂的底物或其它能够触发化学发光反应的物质，包括过氧化氢、过氧化脲、pH调节剂。

2.如权利要求1所述的均相化学发光生物检测方法，其特征在于：所述催化剂为辣根过氧化物酶、所述发光底物为吖啶酯。

3.如权利要求2所述的均相化学发光生物检测方法，其特征在于：所述触发剂为过氧化氢。

4.如权利要求1所述的均相化学发光生物检测方法，其特征在于：所述生物识别分子为能够与待测物发生免疫竞争反应的抗体及其完全抗原；或能够与待测物发生双抗夹心免疫反应的捕获抗体及其检测抗体；或能够与待测物发生DNA分子杂交反应的捕获探针及其检测探针。

5.如权利要求1所述的均相化学发光生物检测方法，其特征在于：当所述待测物为毒死蜱时，所述发光底物标记的生物识别分子浓度为5μg/mL，与所述催化剂标记的生物识别分子浓度为3μg/mL，二者体积比1：1。

6.如权利要求1所述的均相化学发光生物检测方法，其特征在于：当所述待测物为降钙素原时，所述发光底物标记的生物识别分子浓度为8μg/mL，与所述催化剂标记的生物识别分子浓度为5μg/mL，二者体积比1：1。

7.如权利要求1所述的均相化学发光生物检测方法，其特征在于：当所述待测物为沙门氏菌时，所述发光底物标记的生物识别分子浓度为4μmol/L，与所述催化剂标记的生物识别分子浓度为2μmol/L，二者体积比1：1。