[发明专利]一种抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体及其制备方法，其包括以下步骤：（1）利用兔D型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫健康产蛋母鸡，获得高免鸡蛋；（2）取高免鸡蛋蛋黄，除去蛋黄膜并搅匀蛋黄；（3）向蛋黄中加入灭菌双蒸水，搅拌均匀成为蛋黄液，调节蛋黄液的pH值除去脂质，再加入硫酸铵沉淀卵黄抗体；（4）将步骤（3）所得产物透析、灭活和过滤，即得卵黄抗体。本发明所公开的抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体的制备方法，步骤简单，操作简便，通过该方法制备所得的卵黄抗体对兔D型多杀性巴氏杆菌的感染具有很好的预防作用。

技术领域

本发明涉及一种抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体及其制备方法，属于兽用生物技术领域。

背景技术

兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌感染兔引起的一种传染病，分布在世界各地，是影响兔产业发展的重要疾病之一。多杀性巴氏杆菌血清型复杂，根据菌株的荚膜抗原可将其分为血清A、B、D、E和F型菌株，各血清型菌株之间没有交叉保护。流行病学调查显示，近年来血清A型和D型菌株是国内兔群中的主要流行菌株。兔巴氏杆菌病最有效的防控手段是疫苗免疫。然而，国内目前仅有针对血清A型的灭活疫苗。该疫苗仅能对血清A型菌株进行防控，而对血清D型菌株无交叉免疫保护效力。

卵黄抗体是母禽，尤其是蛋鸡，受到外来抗原刺激后，转移并富集于蛋黄中的针对外来抗原的特异性抗体。卵黄抗体具有针对性强、稳定性高和易于大批量制备等优点，已广泛应用于畜禽传染病的防控。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体及其制备方法。为实现上述目的，采用以下技术方案：

一种抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体的制备方法，包括以下步骤：

（1）利用兔D型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫健康产蛋母鸡，获得高免鸡蛋；

（2）取高免鸡蛋蛋黄，除去蛋黄膜并搅匀蛋黄；

（3）向蛋黄中加入灭菌双蒸水，搅拌均匀成为蛋黄液，调节蛋黄液的pH值除去脂质，再加入硫酸铵沉淀卵黄抗体；

（4）将步骤（3）所得产物透析、灭活和过滤，获得卵黄抗体。

所述步骤（1）中兔D型多杀性巴氏杆菌灭活疫苗由多杀性巴氏杆菌PmD01制备，该菌株于2021年3月3日于中国典型培养物保藏中心保藏，分类命名为多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida ）PmD01，保藏号为：CCTCC NO：M 2021201，保藏地址为：武汉大学。该灭活疫苗中抗原含量为2.0×10¹⁰-1.0×10¹¹ CFU/mL。

所述步骤（3）中向蛋黄中加入灭菌双蒸水的体积为蛋黄体积的9倍。

所述步骤（3）中调节蛋黄液的pH值为5.1。

所述步骤（3）中硫酸铵沉淀方法为先加入终浓度为50%（W/V）的硫酸铵，离心，弃上清，沉淀用蛋黄液等体积的灭菌双蒸水溶解；再加入终浓度为33%（W/V）的硫酸铵，离心，弃上清，沉淀用1/10蛋黄液体积的灭菌生理盐水溶解。

所述步骤（4）中透析、灭活和过滤为将步骤（3）所得产物转移入分子量截留为14KD的透析袋中，用蛋黄液（材料中出现的“蛋黄液”都是指步骤（3）中蛋黄与双蒸水混匀之后得到的蛋黄液）等体积的灭菌生理盐水于4℃透析过夜，重复3次，加入体积终浓度为0.1%的甲醛4℃灭活72小时，再用0.45 μm无菌滤器过滤，得到卵黄抗体。

本发明的优点在于：

本发明公开的抗兔D型多杀性巴氏杆菌卵黄抗体的制备方法简单，操作简便，所得卵黄抗体的效价高，能有效预防D型多杀性巴氏杆菌感染兔的发生。

附图说明